細胞培養方式及注意事項

細(xi)胞培養也叫細胞克隆技術，在生物學中的正規名詞為細胞培養技術。不論對于整個生物工程技術，還是其中之一的生物克隆技術來說，細胞培養技術可以由一個細胞經過大量培養成為簡單的單細胞或極少分化的多細胞，細胞培養都是一個必不可少的過程，細胞培養本身就是細胞的大規模克隆。

  細(xi)胞(bao)(bao)培養(yang)是指從體內組織取出細(xi)胞(bao)(bao)膜(mo)，模擬體內生存環境(jing)，在無菌、適當溫度及酸堿度和一定營養(yang)條件下，使其(qi)生長繁殖并維持結構和功能的一種培養(yang)技(ji)術。目(mu)前細(xi)胞(bao)(bao)培養(yang)方式主要包括以下三(san)種：
1、貼壁(bi)培(pei)養
貼(tie)壁(bi)培養主要適(shi)用于貼(tie)壁(bi)依(yi)賴性細胞(bao)(bao)。此類需要相互依(yi)賴，需貼(tie)附(fu)于不(bu)起化學作(zuo)用的(de)(de)物質(zhi)(zhi)（玻(bo)璃或(huo)塑料等無活性物質(zhi)(zhi)）的(de)(de)表(biao)面(mian)生(sheng)長、生(sheng)存和(he)維持，并終在附(fu)著面(mian)生(sheng)長至(zhi)單層(ceng)，鋪滿平面(mian)時便會發生(sheng)接觸抑制(zhi)。大多數動(dong)物細胞(bao)(bao)，包括非淋巴組織的(de)(de)細胞(bao)(bao)和(he)許(xu)多異(yi)倍體體系的(de)(de)細胞(bao)(bao)屬于這一類型，他們(men)需要附(fu)著于適(shi)量(liang)正電(dian)荷的(de)(de)固(gu)體或(huo)半(ban)固(gu)體的(de)(de)表(biao)面(mian)勝仗。
2、懸浮培養(yang)
來源于血(xue)液、淋巴組織的(de)(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，及(ji)許多(duo)腫瘤(liu)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)（包括(kuo)雜交瘤(liu)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)）和某些轉化細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)等(deng)屬于懸浮(fu)(fu)培(pei)(pei)養型細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)為非貼(tie)壁(bi)依賴性細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，無(wu)需支撐面，細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)或(huo)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)聚集體懸浮(fu)(fu)于液體培(pei)(pei)養基中增殖(zhi)。懸浮(fu)(fu)培(pei)(pei)養是大規模(mo)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)培(pei)(pei)養的(de)(de)理想方式，可采用類似(si)于微(wei)生(sheng)物的(de)(de)方法進行懸浮(fu)(fu)培(pei)(pei)養。
3、固定(ding)化培養
動物(wu)細(xi)胞(bao)較微生(sheng)物(wu)脆弱(ruo)，易受剪(jian)切力等(deng)的影響，而細(xi)胞(bao)固(gu)定(ding)化(hua)(hua)(hua)(hua)技術(shu)可較好的保(bao)護(hu)細(xi)胞(bao)免受機械力及環境變化(hua)(hua)(hua)(hua)的影響，提(ti)高細(xi)胞(bao)的耐受力，促使細(xi)胞(bao)高密度(du)培養，提(ti)高目的產(chan)物(wu)的產(chan)率(lv)。在傳統的固(gu)定(ding)化(hua)(hua)(hua)(hua)酶技術(shu)中(zhong)，常采用戊(wu)2醛(quan)、聚(ju)丙(bing)烯酰胺、聚(ju)氨酯等(deng)作為固(gu)定(ding)化(hua)(hua)(hua)(hua)細(xi)胞(bao)載體(ti)。但在動物(wu)細(xi)胞(bao)培養中(zhong)，一(yi)般使用較溫(wen)和的固(gu)定(ding)方法，如吸附、包埋(mai)、中(zhong)空纖維或膠囊化(hua)(hua)(hua)(hua)等(deng)，具有剪(jian)切力低、傳遞效(xiao)果好和抗污(wu)染能力強、細(xi)胞(bao)生(sheng)長密度(du)高、產(chan)物(wu)易于收集和分離純化(hua)(hua)(hua)(hua)等(deng)特點。
由于所培養的細胞的不同，固定化培養的方式也有不同，一般對于貼壁依賴性細胞通常采用膠原包埋，而對于非貼壁依賴性細胞則常用海藻酸鈣包埋。常用的細胞固定化的方法主要有吸附、共價貼附、離子/共價交聯、包埋和微囊化等。

防止細胞培(pei)養出現污染的方(fang)法如(ru)下(xia)：
1、從培養箱取放細胞前，用酒精清潔雙手（或手套），盡量縮短開門時間和減少開門次數。培養瓶放入培養箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精揮發后再放入，以免培養箱內滯留過多乙醇蒸氣。
2、操作的時候防護服、口罩、手套缺一不可。操作前，準備好所有實驗所需物品，以減少走動，物品需有序擺放在超凈臺觸手可及的地方，同時空留足夠操作空間。
3、操作時，試劑不用盡量及時蓋上蓋子，移至操作區外圍，盡量不要從開口容器上經過。
4、使用移液槍時，將容器傾斜以便于移液，切勿將槍桿碰觸瓶口及內壁。一旦發生倒吸情況，要及時用酒精棉球擦拭，以免液體殘留導致細菌滋生。
5、凍存細胞時凍存管蓋子需擰緊。復蘇細胞時，從液氮罐取出凍存管，輕擰蓋子，以確認蓋子是否擰緊。