細胞培養方式及注意事項

細胞培養也叫細胞克隆技術，在生物學中的正規名詞為細胞培養技術。不論對于整個生物工程技術，還是其中之一的生物克隆技術來說，細胞培養技術可以由一個細胞經過大量培養成為簡單的單細胞或極少分化的多細胞，細胞培養都是一個必不可少的過程，細胞培養本身就是細胞的大規模克隆。

  細(xi)胞(bao)培養是指從(cong)體(ti)內組織取(qu)出(chu)細(xi)胞(bao)膜(mo)，模擬(ni)體(ti)內生(sheng)存(cun)環(huan)境，在(zai)無(wu)菌、適(shi)當溫度及酸堿度和一(yi)定(ding)營養條件下，使(shi)其生(sheng)長繁殖并維持結(jie)構和功能的一(yi)種(zhong)培養技術。目前細(xi)胞(bao)培養方式主(zhu)要包括以下三種(zhong)：
1、貼(tie)壁培養
貼(tie)壁培養主要(yao)適用于貼(tie)壁依(yi)賴性細(xi)胞(bao)。此類需要(yao)相互依(yi)賴，需貼(tie)附(fu)于不起化學作用的(de)(de)物質(zhi)（玻璃(li)或塑(su)料等無(wu)活性物質(zhi)）的(de)(de)表面(mian)生(sheng)長(chang)、生(sheng)存(cun)和(he)維持，并終在附(fu)著面(mian)生(sheng)長(chang)至單層，鋪滿平面(mian)時便會發生(sheng)接觸抑(yi)制。大多數動物細(xi)胞(bao)，包(bao)括非淋(lin)巴組(zu)織(zhi)的(de)(de)細(xi)胞(bao)和(he)許多異倍體體系的(de)(de)細(xi)胞(bao)屬于這(zhe)一類型(xing)，他們需要(yao)附(fu)著于適量(liang)正電(dian)荷的(de)(de)固體或半固體的(de)(de)表面(mian)勝仗。
2、懸(xuan)浮培養
來源于(yu)(yu)血液、淋巴組織的(de)(de)細胞(bao)(bao)，及許(xu)多腫瘤細胞(bao)(bao)（包括(kuo)雜(za)交瘤細胞(bao)(bao)）和(he)某(mou)些轉化細胞(bao)(bao)等屬于(yu)(yu)懸(xuan)(xuan)浮培(pei)養(yang)(yang)(yang)型細胞(bao)(bao)，細胞(bao)(bao)為非(fei)貼壁依賴性細胞(bao)(bao)，無需支撐面，細胞(bao)(bao)或(huo)細胞(bao)(bao)聚集體懸(xuan)(xuan)浮于(yu)(yu)液體培(pei)養(yang)(yang)(yang)基中增殖。懸(xuan)(xuan)浮培(pei)養(yang)(yang)(yang)是大(da)規模細胞(bao)(bao)培(pei)養(yang)(yang)(yang)的(de)(de)理(li)想方式(shi)，可采用類似于(yu)(yu)微生物的(de)(de)方法(fa)進行(xing)懸(xuan)(xuan)浮培(pei)養(yang)(yang)(yang)。
3、固定(ding)化(hua)培養(yang)
動(dong)物(wu)(wu)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)較微生(sheng)物(wu)(wu)脆(cui)弱(ruo)，易(yi)受剪切力(li)等的(de)(de)影(ying)響(xiang)，而細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)固(gu)(gu)定(ding)(ding)化(hua)(hua)技(ji)(ji)術可(ke)較好(hao)的(de)(de)保(bao)護細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)免受機械力(li)及環境變化(hua)(hua)的(de)(de)影(ying)響(xiang)，提(ti)高(gao)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)的(de)(de)耐受力(li)，促使細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)高(gao)密(mi)度培(pei)(pei)養，提(ti)高(gao)目的(de)(de)產物(wu)(wu)的(de)(de)產率。在傳(chuan)統的(de)(de)固(gu)(gu)定(ding)(ding)化(hua)(hua)酶技(ji)(ji)術中，常采用(yong)戊2醛、聚(ju)丙烯酰胺、聚(ju)氨酯等作為固(gu)(gu)定(ding)(ding)化(hua)(hua)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)載(zai)體。但在動(dong)物(wu)(wu)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)培(pei)(pei)養中，一般使用(yong)較溫和(he)(he)(he)的(de)(de)固(gu)(gu)定(ding)(ding)方(fang)法(fa)，如吸附、包埋、中空纖維或膠囊化(hua)(hua)等，具有剪切力(li)低、傳(chuan)遞效果(guo)好(hao)和(he)(he)(he)抗污染能力(li)強、細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)生(sheng)長密(mi)度高(gao)、產物(wu)(wu)易(yi)于(yu)收集和(he)(he)(he)分(fen)離純化(hua)(hua)等特點。
由于所培養的細胞的不同，固定化培養的方式也有不同，一般對于貼壁依賴性細胞通常采用膠原包埋，而對于非貼壁依賴性細胞則常用海藻酸鈣包埋。常用的細胞固定化的方法主要有吸附、共價貼附、離子/共價交聯、包埋和微囊化等。

防止(zhi)細胞培(pei)養出現(xian)污染的方法如下：
1、從培養箱取放細胞前，用酒精清潔雙手（或手套），盡量縮短開門時間和減少開門次數。培養瓶放入培養箱前，用酒精消毒表面，并稍等至酒精揮發后再放入，以免培養箱內滯留過多乙醇蒸氣。
2、操作的時候防護服、口罩、手套缺一不可。操作前，準備好所有實驗所需物品，以減少走動，物品需有序擺放在超凈臺觸手可及的地方，同時空留足夠操作空間。
3、操作時，試劑不用盡量及時蓋上蓋子，移至操作區外圍，盡量不要從開口容器上經過。
4、使用移液槍時，將容器傾斜以便于移液，切勿將槍桿碰觸瓶口及內壁。一旦發生倒吸情況，要及時用酒精棉球擦拭，以免液體殘留導致細菌滋生。
5、凍存細胞時凍存管蓋子需擰緊。復蘇細胞時，從液氮罐取出凍存管，輕擰蓋子，以確認蓋子是否擰緊。