細胞劃痕實驗干貨分享

        傷口愈合(he)試驗(yan)，也通常(chang)稱為“劃(hua)(hua)痕(hen)試驗(yan)”，是一(yi)種廣(guang)泛建立的研究(jiu)體外(wai)(wai)集體細(xi)(xi)胞遷移(yi)的技術(shu)。細(xi)(xi)胞劃(hua)(hua)痕(hen)（Wound Healing)是一(yi)種操作簡單，經濟實惠的研究(jiu)細(xi)(xi)胞遷移(yi)/腫(zhong)瘤侵襲的體外(wai)(wai)試驗(yan)方法。其實驗(yan)原理是，當(dang)細(xi)(xi)胞長到融(rong)合(he)成單層狀態時，在(zai)融(rong)合(he)的單層細(xi)(xi)胞上人為一(yi)個空白區(qu)域，稱為“劃(hua)(hua)痕(hen)”。劃(hua)(hua)痕(hen)邊緣的細(xi)(xi)胞會逐漸進入(ru)空白區(qu)域使“劃(hua)(hua)痕(hen)”愈合(he)。

     條件好的(de)(de)實驗室可(ke)(ke)以(yi)使(shi)用活細胞成像來分析(xi)創傷愈合實驗中角質形成細胞或者成纖維細胞的(de)(de)遷移(yi)活動(dong)。結(jie)合包含的(de)(de)軟件分析(xi)算法，有可(ke)(ke)能延遲量化間隙(xi)表(biao)面關閉和關閉推移(yi)時間的(de)(de)速度。使(shi)用延時顯微鏡獲取數據(ju)的(de)(de)優點(dian)是，可(ke)(ke)以(yi)在(zai)恒溫箱內(nei)確定(ding)和穩定(ding)的(de)(de)條件下記錄(lu)傷口分析(xi)。

      通(tong)常，用于(yu)傷口愈合試驗(yan)的(de)(de)細胞(bao)(bao)類型(xing)旨在重建表皮(pi)的(de)(de)再(zai)生特征。永生化的(de)(de)細胞(bao)(bao)系和原代細胞(bao)(bao)經常被用作這方面的(de)(de)模型(xing)。蕞常用的(de)(de)細胞(bao)(bao)類型(xing)是角質形成細胞(bao)(bao)和成纖維細胞(bao)(bao)。

     條(tiao)件(jian)(jian)好的(de)實驗(yan)室可以使用活細(xi)胞成(cheng)像來分析創傷愈(yu)合(he)實驗(yan)中(zhong)角質形成(cheng)細(xi)胞或者成(cheng)纖維細(xi)胞的(de)遷移(yi)活動。結合(he)包含的(de)軟件(jian)(jian)分析算法(fa)，有可能延遲量化間隙表(biao)面(mian)關閉(bi)和關閉(bi)推移(yi)時(shi)間的(de)速度(du)。使用延時(shi)顯(xian)微鏡獲(huo)取數(shu)據的(de)優點是，可以在恒溫箱內確定和穩定的(de)條(tiao)件(jian)(jian)下記錄傷口分析。

      通常(chang)，用(yong)(yong)于傷口愈(yu)合試驗的細胞(bao)(bao)類型旨在(zai)重建表皮的再生(sheng)特征。永(yong)生(sheng)化的細胞(bao)(bao)系(xi)和原代細胞(bao)(bao)經常(chang)被用(yong)(yong)作這方面(mian)的模(mo)型。蕞常(chang)用(yong)(yong)的細胞(bao)(bao)類型是角質(zhi)形成細胞(bao)(bao)和成纖維(wei)細胞(bao)(bao)。

制作劃痕實驗需要注意事項：

1. 細(xi)(xi)(xi)胞(bao)的密度；劃(hua)痕實驗一般(ban)是(shi)幾種細(xi)(xi)(xi)胞(bao)的結合，但是(shi)每種細(xi)(xi)(xi)胞(bao)的生長速度會(hui)不一樣，所以(yi)需要按照細(xi)(xi)(xi)胞(bao)的生長特性(xing)調(diao)整培養時(shi)間，細(xi)(xi)(xi)胞(bao)鋪(pu)滿(man)孔底時(shi)劃(hua)痕的效果會(hui)比較(jiao)好，建議(yi)是(shi)100%的鋪(pu)滿(man)。

2. 用槍(qiang)頭畫線(xian)時盡(jin)量(liang)垂(chui)直，以6孔板為例 ，一個孔可以畫6條線(xian)。

3. 畫線之后一定要用PBS洗兩次，以去除劃下的細胞(bao)。

4. 注意培(pei)(pei)養方式一定要改(gai)成無血清或者低(di)(di)血清的(de)培(pei)(pei)養基，因為：劃(hua)痕后用(yong)無血清培(pei)(pei)養基培(pei)(pei)養細胞(bao)(bao)(bao)，意在(zai)說明(ming)在(zai)監(jian)測的(de) 24 小(xiao)(xiao)時(shi)內，劃(hua)痕的(de)縮小(xiao)(xiao)是細胞(bao)(bao)(bao) 遷(qian)移(yi)作用(yong)的(de)結果，所以要將細胞(bao)(bao)(bao)增殖造成細胞(bao)(bao)(bao)遷(qian)移(yi)的(de)影響降到蕞低(di)(di)；但若(ruo)細胞(bao)(bao)(bao)改(gai)成無血清培(pei)(pei)養后大(da)面積漂浮，需要適(shi)量(liang)加入血清濃(nong)度不能高于2%。

5. 放入37℃ 5% CO2培(pei)養箱，培(pei)養。可按(an)0，10，12，15時(shi)間(jian)(jian)點取樣，拍照(具體時(shi)間(jian)(jian)依(yi)實驗需要而定)。

6. 統計(ji)方法(fa)：使用Image J軟(ruan)件打開圖片后(hou)，抓取自己畫的線條(tiao)，計(ji)算細(xi)胞間距(ju)離的平均值。