ELISA試劑盒試驗包被過程分析

      將抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)或(huo)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)固(gu)(gu)定(ding)(ding)在(zai)(zai)過(guo)程稱為(wei)包(bao)(bao)(bao)(bao)被(bei)(bei)(coating)。換言(yan)之(zhi)，包(bao)(bao)(bao)(bao)被(bei)(bei)即是(shi)(shi)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)或(huo)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)結合到固(gu)(gu)相(xiang)載體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)表面(mian)的(de)(de)(de)(de)過(guo)程。蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)與聚苯yi烯(xi)固(gu)(gu)相(xiang)載體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)是(shi)(shi)通(tong)過(guo)物理吸(xi)(xi)(xi)附(fu)結合的(de)(de)(de)(de)，靠(kao)的(de)(de)(de)(de)是(shi)(shi)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)分(fen)子(zi)結構上的(de)(de)(de)(de)疏(shu)(shu)水(shui)(shui)基團與固(gu)(gu)相(xiang)載體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)表面(mian)的(de)(de)(de)(de)疏(shu)(shu)水(shui)(shui)基團間(jian)(jian)的(de)(de)(de)(de)作(zuo)用(yong)(yong)(yong)力(li)。這(zhe)種(zhong)物理吸(xi)(xi)(xi)附(fu)是(shi)(shi)非特(te)異(yi)性的(de)(de)(de)(de)，受蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)的(de)(de)(de)(de)分(fen)子(zi)量、等電點、濃(nong)度等的(de)(de)(de)(de)影響。載體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)對不(bu)同蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)的(de)(de)(de)(de)吸(xi)(xi)(xi)附(fu)能(neng)(neng)力(li)是(shi)(shi)不(bu)相(xiang)同的(de)(de)(de)(de)，大分(fen)子(zi)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)較小(xiao)分(fen)子(zi)蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)通(tong)常含有更多(duo)的(de)(de)(de)(de)疏(shu)(shu)水(shui)(shui)基團，故更易吸(xi)(xi)(xi)附(fu)到固(gu)(gu)相(xiang)載體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)表面(mian)。IgG對聚苯yi烯(xi)等固(gu)(gu)相(xiang)具有較強(qiang)的(de)(de)(de)(de)吸(xi)(xi)(xi)附(fu)力(li)，其(qi)聯結多(duo)發生(sheng)在(zai)(zai)Fc段上，抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)結合點暴露(lu)于(yu)(yu)(yu)(yu)外，因(yin)此(ci)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)的(de)(de)(de)(de)包(bao)(bao)(bao)(bao)被(bei)(bei)一(yi)般均采(cai)(cai)(cai)用(yong)(yong)(yong)直接(jie)(jie)(jie)吸(xi)(xi)(xi)附(fu)法。蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)大多(duo)也(ye)可(ke)(ke)采(cai)(cai)(cai)用(yong)(yong)(yong)與抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)相(xiang)似的(de)(de)(de)(de)方(fang)法包(bao)(bao)(bao)(bao)被(bei)(bei)。當抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)決(jue)定(ding)(ding)簇(cu)存(cun)在(zai)(zai)于(yu)(yu)(yu)(yu)或(huo)鄰近于(yu)(yu)(yu)(yu)疏(shu)(shu)水(shui)(shui)區(qu)域時(shi)，抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)與固(gu)(gu)相(xiang)載體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)的(de)(de)(de)(de)直接(jie)(jie)(jie)吸(xi)(xi)(xi)附(fu)可(ke)(ke)使抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)決(jue)定(ding)(ding)簇(cu)不(bu)能(neng)(neng)充分(fen)暴露(lu)，在(zai)(zai)這(zhe)種(zhong)情況下，直接(jie)(jie)(jie)包(bao)(bao)(bao)(bao)被(bei)(bei)效果不(bu)佳，可(ke)(ke)以采(cai)(cai)(cai)用(yong)(yong)(yong)間(jian)(jian)接(jie)(jie)(jie)的(de)(de)(de)(de)捕(bu)獲包(bao)(bao)(bao)(bao)被(bei)(bei)法，即先將針對該(gai)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)的(de)(de)(de)(de)特(te)異(yi)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)作(zuo)預(yu)包(bao)(bao)(bao)(bao)被(bei)(bei)，其(qi)后(hou)通(tong)過(guo)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)反應使抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)固(gu)(gu)相(xiang)化。此(ci)間(jian)(jian)接(jie)(jie)(jie)結合在(zai)(zai)固(gu)(gu)相(xiang)上的(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)遠離載體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)表面(mian)，其(qi)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)決(jue)定(ding)(ding)簇(cu)也(ye)得以充分(fen)暴露(lu)。間(jian)(jian)接(jie)(jie)(jie)包(bao)(bao)(bao)(bao)被(bei)(bei)的(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)經(jing)(jing)固(gu)(gu)相(xiang)抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)的(de)(de)(de)(de)親和(he)(he)層析作(zuo)用(yong)(yong)(yong)，包(bao)(bao)(bao)(bao)被(bei)(bei)在(zai)(zai)固(gu)(gu)相(xiang)上的(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)純度大大提高，因(yin)此(ci)含雜質(zhi)較多(duo)的(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)也(ye)可(ke)(ke)采(cai)(cai)(cai)用(yong)(yong)(yong)捕(bu)獲包(bao)(bao)(bao)(bao)被(bei)(bei)法，試驗(yan)的(de)(de)(de)(de)特(te)異(yi)性、敏感性均由(you)此(ci)得以改善，重復性亦(yi)佳。間(jian)(jian)接(jie)(jie)(jie)包(bao)(bao)(bao)(bao)被(bei)(bei)的(de)(de)(de)(de)另一(yi)優點是(shi)(shi)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)用(yong)(yong)(yong)量少，僅為(wei)直接(jie)(jie)(jie)包(bao)(bao)(bao)(bao)被(bei)(bei)的(de)(de)(de)(de)1/10乃至于(yu)(yu)(yu)(yu)/100。不(bu)易吸(xi)(xi)(xi)附(fu)在(zai)(zai)聚苯yi烯(xi)載體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)上的(de)(de)(de)(de)非蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)可(ke)(ke)采(cai)(cai)(cai)用(yong)(yong)(yong)特(te)殊(shu)的(de)(de)(de)(de)包(bao)(bao)(bao)(bao)被(bei)(bei)方(fang)式。例如(ru)，在(zai)(zai)檢測(ce)抗(kang)(kang)DNA抗(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)時(shi)，需用(yong)(yong)(yong)DNA作(zuo)為(wei)包(bao)(bao)(bao)(bao)被(bei)(bei)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)，而(er)普遍的(de)(de)(de)(de)固(gu)(gu)相(xiang)載體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)一(yi)般不(bu)能(neng)(neng)直接(jie)(jie)(jie)與核(he)酸(suan)結合。可(ke)(ke)將聚苯yi烯(xi)板先經(jing)(jing)紫(zi)外線(xian)照射(she)(she)（例如(ru)30W紫(zi)外燈，75cm照射(she)(she)12小(xiao)時(shi)），以增加其(qi)吸(xi)(xi)(xi)附(fu)性能(neng)(neng)。固(gu)(gu)相(xiang)載體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)先用(yong)(yong)(yong)堿性蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)質(zhi)，如(ru)聚賴氨酸(suan)、魚精蛋(dan)(dan)(dan)白(bai)(bai)(bai)(bai)等作(zuo)預(yu)包(bao)(bao)(bao)(bao)被(bei)(bei)，也(ye)可(ke)(ke)提高核(he)酸(suan)的(de)(de)(de)(de)結合力(li)。也(ye)可(ke)(ke)用(yong)(yong)(yong)親和(he)(he)素生(sheng)物素系(xi)統(tong)作(zuo)間(jian)(jian)接(jie)(jie)(jie)包(bao)(bao)(bao)(bao)被(bei)(bei)，即用(yong)(yong)(yong)親和(he)(he)素先包(bao)(bao)(bao)(bao)被(bei)(bei)載體(ti)(ti)(ti)(ti)(ti)，然(ran)后(hou)加入生(sheng)物素化的(de)(de)(de)(de)DNA，這(zhe)種(zhong)包(bao)(bao)(bao)(bao)被(bei)(bei)方(fang)法均勻、牢(lao)固(gu)(gu)，已擴(kuo)大應用(yong)(yong)(yong)于(yu)(yu)(yu)(yu)各種(zhong)抗(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)物質(zhi)的(de)(de)(de)(de)定(ding)(ding)量測(ce)定(ding)(ding)。

      脂類物質無(wu)法(fa)與(yu)固(gu)相載體(ti)結(jie)合(he)，可(ke)將其在(zai)有機(ji)溶劑（例如乙醇(chun)）中溶解后加入ELISA板(ban)孔中，開(kai)蓋置冰箱過夜或冷風吹干(gan)，待酒精揮發(fa)后，讓脂質自然干(gan)固(gu)在(zai)固(gu)相表(biao)面。抗(kang)(kang)心磷脂抗(kang)(kang)體(ti)的ELISA試劑一般采用這(zhe)種(zhong)包被方式。

1、包被用抗原

用于包(bao)被固相(xiang)載體(ti)(ti)(ti)(ti)的(de)(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)按其(qi)(qi)(qi)(qi)來源不(bu)同可(ke)分(fen)為(wei)(wei)天(tian)然(ran)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)、重組(zu)(zu)(zu)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)和合(he)成多(duo)(duo)(duo)肽(tai)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)三大(da)(da)(da)類(lei)。天(tian)然(ran)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)可(ke)取(qu)(qu)(qu)(qu)自動物(wu)組(zu)(zu)(zu)織、微生(sheng)物(wu)培(pei)養物(wu)等(deng)，須(xu)經提(ti)取(qu)(qu)(qu)(qu)純化才能(neng)作(zuo)包(bao)被用。如(ru)(ru)HBsAg可(ke)以從(cong)攜帶(dai)者(zhe)的(de)(de)(de)(de)(de)血(xue)清中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)提(ti)取(qu)(qu)(qu)(qu)，一(yi)般的(de)(de)(de)(de)(de)細菌和病(bing)毒(du)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)可(ke)以從(cong)其(qi)(qi)(qi)(qi)培(pei)養物(wu)中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)提(ti)取(qu)(qu)(qu)(qu)，蛋(dan)白(bai)(bai)成份抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)可(ke)從(cong)富含此抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)的(de)(de)(de)(de)(de)材料中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)提(ti)取(qu)(qu)(qu)(qu)等(deng)（例(li)如(ru)(ru)AFP從(cong)臍帶(dai)血(xue)或胎肝(gan)中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)提(ti)取(qu)(qu)(qu)(qu)）。重組(zu)(zu)(zu)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)是抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)基因(yin)在(zai)(zai)質(zhi)(zhi)粒(li)體(ti)(ti)(ti)(ti)中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)表(biao)達(da)的(de)(de)(de)(de)(de)蛋(dan)白(bai)(bai)質(zhi)(zhi)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)，多(duo)(duo)(duo)以大(da)(da)(da)腸(chang)(chang)桿(gan)菌或酵(jiao)母菌為(wei)(wei)質(zhi)(zhi)粒(li)體(ti)(ti)(ti)(ti)。重組(zu)(zu)(zu)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)的(de)(de)(de)(de)(de)優點是除(chu)工(gong)程(cheng)菌成份外(wai)，其(qi)(qi)(qi)(qi)他(ta)雜質(zhi)(zhi)少，而且(qie)(qie)無(wu)傳(chuan)染性，但(dan)純化技術難度(du)較大(da)(da)(da)。以大(da)(da)(da)腸(chang)(chang)桿(gan)菌為(wei)(wei)質(zhi)(zhi)粒(li)體(ti)(ti)(ti)(ti)的(de)(de)(de)(de)(de)重組(zu)(zu)(zu)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)如(ru)(ru)不(bu)能(neng)充分(fen)除(chu)大(da)(da)(da)腸(chang)(chang)桿(gan)菌成份，用于ELISA，在(zai)(zai)反應中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)可(ke)出現假陽性，因(yin)不(bu)少受(shou)檢(jian)者(zhe)受(shou)大(da)(da)(da)腸(chang)(chang)桿(gan)菌感染而在(zai)(zai)血(xue)清中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)存在(zai)(zai)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)大(da)(da)(da)腸(chang)(chang)桿(gan)菌抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)。重組(zu)(zu)(zu)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)的(de)(de)(de)(de)(de)另一(yi)特點是能(neng)用基因(yin)工(gong)程(cheng)制備(bei)(bei)某(mou)些無(wu)法從(cong)天(tian)然(ran)材料中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)分(fen)離(li)的(de)(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)物(wu)質(zhi)(zhi)。例(li)如(ru)(ru)丙型肝(gan)炎病(bing)毒(du)（HCV）尚(shang)不(bu)能(neng)培(pei)養成功，而且(qie)(qie)丙肝(gan)病(bing)人血(xue)清中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)HCV抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)含量極微。目前檢(jian)測抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)HCV ELISA中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)所用包(bao)被抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)大(da)(da)(da)多(duo)(duo)(duo)為(wei)(wei)根(gen)(gen)據(ju)HCV的(de)(de)(de)(de)(de)基因(yin)克隆表(biao)達(da)而制備(bei)(bei)的(de)(de)(de)(de)(de)重組(zu)(zu)(zu)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)。在(zai)(zai)傳(chuan)染病(bing)診斷中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)，不(bu)少重組(zu)(zu)(zu)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)如(ru)(ru)HBsAg、HBeAg和HIV抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)等(deng)均在(zai)(zai)ELISA中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)取(qu)(qu)(qu)(qu)得(de)應用。合(he)成多(duo)(duo)(duo)肽(tai)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)是根(gen)(gen)據(ju)蛋(dan)白(bai)(bai)質(zhi)(zhi)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)分(fen)子的(de)(de)(de)(de)(de)某(mou)一(yi)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)決(jue)(jue)定簇(cu)的(de)(de)(de)(de)(de)氨(an)基酸序列(lie)人工(gong)合(he)成的(de)(de)(de)(de)(de)多(duo)(duo)(duo)肽(tai)片段。多(duo)(duo)(duo)肽(tai)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)一(yi)般只含有(you)一(yi)個抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)決(jue)(jue)定簇(cu)，純度(du)高，特異(yi)性也高，但(dan)由于分(fen)子量太小，往(wang)(wang)(wang)往(wang)(wang)(wang)難于直(zhi)接吸附于固相(xiang)上(shang)。多(duo)(duo)(duo)肽(tai)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)的(de)(de)(de)(de)(de)包(bao)被一(yi)般需先(xian)使(shi)其(qi)(qi)(qi)(qi)與(yu)(yu)無(wu)關蛋(dan)白(bai)(bai)質(zhi)(zhi)如(ru)(ru)牛血(xue)清白(bai)(bai)蛋(dan)白(bai)(bai)質(zhi)(zhi)（BSA）等(deng)偶(ou)聯，借(jie)助(zhu)于偶(ou)聯物(wu)與(yu)(yu)固相(xiang)載體(ti)(ti)(ti)(ti)的(de)(de)(de)(de)(de)吸附，間(jian)接地結(jie)合(he)到固相(xiang)載體(ti)(ti)(ti)(ti)表(biao)面。應用多(duo)(duo)(duo)肽(tai)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)的(de)(de)(de)(de)(de)另一(yi)注意(yi)點為(wei)(wei)他(ta)僅能(neng)檢(jian)測與(yu)(yu)其(qi)(qi)(qi)(qi)相(xiang)應的(de)(de)(de)(de)(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)。一(yi)種蛋(dan)白(bai)(bai)質(zhi)(zhi)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)往(wang)(wang)(wang)往(wang)(wang)(wang)含有(you)多(duo)(duo)(duo)個不(bu)同的(de)(de)(de)(de)(de)能(neng)引起抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)產生(sheng)的(de)(de)(de)(de)(de)決(jue)(jue)定簇(cu)，因(yin)此在(zai)(zai)受(shou)檢(jian)血(xue)清中(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)(de)其(qi)(qi)(qi)(qi)他(ta)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)就不(bu)能(neng)與(yu)(yu)該多(duo)(duo)(duo)肽(tai)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)發生(sheng)反應。另外(wai)，某(mou)些微生(sheng)物(wu)發生(sheng)變(bian)異(yi)時往(wang)(wang)(wang)往(wang)(wang)(wang)發生(sheng)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)結(jie)構變(bian)化，在(zai)(zai)這種情況下，用個別多(duo)(duo)(duo)肽(tai)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)(yuan)進行包(bao)被可(ke)引起其(qi)(qi)(qi)(qi)他(ta)抗(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)(kang)體(ti)(ti)(ti)(ti)的(de)(de)(de)(de)(de)漏檢(jian)。 檢(jian)驗地帶(dai)網(wang)

2、包被用抗體

包(bao)被(bei)固相載體的(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體應具有高(gao)(gao)親和力(li)和高(gao)(gao)特(te)(te)異(yi)性(xing)，可(ke)(ke)取材于(yu)抗(kang)(kang)(kang)(kang)血(xue)清(qing)或含(han)單(dan)克隆(long)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體的(de)腹(fu)水(shui)(shui)或培養(yang)液。如免疫用抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)中(zhong)含(han)有雜(za)(za)質(zhi)（即(ji)便是極微量的(de)），在(zai)抗(kang)(kang)(kang)(kang)血(xue)清(qing)中(zhong)將出(chu)現雜(za)(za)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體，必須除(chu)去（可(ke)(ke)用吸收(shou)法）后才能用于(yu)ELISA，以(yi)保證試(shi)驗的(de)特(te)(te)異(yi)性(xing)。抗(kang)(kang)(kang)(kang)血(xue)清(qing)不能直接用于(yu)包(bao)被(bei)，應先提(ti)取IgG，通常采用硫(liu)酸(suan)銨(an)鹽析和Sephadex凝膠過濾法。一(yi)般經硫(liu)酸(suan)銨(an)鹽析粗(cu)提(ti)的(de)IgG已可(ke)(ke)用于(yu)包(bao)被(bei)，高(gao)(gao)度(du)純(chun)化(hua)(hua)的(de)IgG性(xing)質(zhi)不穩(wen)定。如需用高(gao)(gao)親和力(li)的(de)抗(kang)(kang)(kang)(kang)體包(bao)被(bei)以(yi)提(ti)高(gao)(gao)試(shi)驗的(de)敏感性(xing)，則可(ke)(ke)采用親和層析法以(yi)除(chu)去抗(kang)(kang)(kang)(kang)血(xue)清(qing)中(zhong)含(han)量較(jiao)多(duo)的(de)非特(te)(te)異(yi)性(xing)IgG。腹(fu)水(shui)(shui)中(zhong)單(dan)抗(kang)(kang)(kang)(kang)的(de)濃度(du)較(jiao)高(gao)(gao)，特(te)(te)異(yi)性(xing)亦較(jiao)強，因此不需要作(zuo)吸收(shou)和親和層析處理(li)，一(yi)般可(ke)(ke)將腹(fu)水(shui)(shui)作(zuo)適當稀釋后直接包(bao)被(bei)，必要時也可(ke)(ke)用純(chun)化(hua)(hua)的(de)IgG。應用單(dan)抗(kang)(kang)(kang)(kang)包(bao)被(bei)時應注意，一(yi)種單(dan)抗(kang)(kang)(kang)(kang)僅針對一(yi)種抗(kang)(kang)(kang)(kang)原(yuan)決(jue)定簇，在(zai)某些情況(kuang)下，用多(duo)種單(dan)抗(kang)(kang)(kang)(kang)混合包(bao)被(bei)，可(ke)(ke)取得更(geng)好的(de)效果。

3、包被的條件

包(bao)被(bei)(bei)用(yong)(yong)抗原或抗體的(de)(de)(de)(de)濃(nong)度(du)(du)(du)，包(bao)被(bei)(bei)的(de)(de)(de)(de)溫(wen)度(du)(du)(du)和(he)時間，包(bao)被(bei)(bei)液(ye)(ye)(ye)的(de)(de)(de)(de)pH等應(ying)根據(ju)試驗(yan)的(de)(de)(de)(de)特點和(he)材(cai)(cai)料的(de)(de)(de)(de)性質而選(xuan)定(ding)。抗體和(he)蛋白質抗原一(yi)般采用(yong)(yong)pH9.6的(de)(de)(de)(de)碳酸(suan)鹽(yan)緩(huan)沖(chong)液(ye)(ye)(ye)作為稀釋液(ye)(ye)(ye)，也(ye)有用(yong)(yong)pH7.2的(de)(de)(de)(de)磷酸(suan)鹽(yan)緩(huan)沖(chong)液(ye)(ye)(ye)及pH7~8的(de)(de)(de)(de)Tris-HCL緩(huan)沖(chong)液(ye)(ye)(ye)作為稀釋液(ye)(ye)(ye)的(de)(de)(de)(de)。通常在ELISA板孔中(zhong)(zhong)加(jia)入包(bao)被(bei)(bei)液(ye)(ye)(ye)后(hou)，在4-8℃冰箱中(zhong)(zhong)放置過(guo)夜(ye)，37℃中(zhong)(zhong)保(bao)溫(wen)2小時被(bei)(bei)認為具有同等的(de)(de)(de)(de)包(bao)被(bei)(bei)效果。包(bao)被(bei)(bei)的(de)(de)(de)(de)最適當濃(nong)度(du)(du)(du)隨載體和(he)包(bao)被(bei)(bei)物的(de)(de)(de)(de)性質可有很大的(de)(de)(de)(de)變化，每批材(cai)(cai)料需通過(guo)實驗(yan)與酶結(jie)合物的(de)(de)(de)(de)濃(nong)度(du)(du)(du)協調選(xuan)定(ding)。一(yi)般蛋白質的(de)(de)(de)(de)包(bao)被(bei)(bei)濃(nong)度(du)(du)(du)為100ng/ml-20ug/ml。