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逆轉錄酶共有的活性

不同的逆轉錄酶具有不同的功能活性,表現出不同的逆轉錄效率,如合成cDNA的長度,產量,對復雜模板的適應程度等。通常共有的活性如下:
1、RNA指導的DNA聚合酶活性:以RNA為模板,催化dNTP聚合形成DNA的過程。
2、RNaseH活性:在反應過程中切割RNA:cDNA雜合鏈中的RNA模板。降低此活性,可避免在合成較長cDNA之前模板RNA被降解掉。
3、DNA指導的DNA聚合酶活性:以反轉錄合成的第一條cDNA單鏈為模板,再合成第二條cDNA分子。
4、熱穩定性:此性能是影響cDNA合成的重要因素。升高反轉錄過程中的溫度,有助于高GC或復雜二級結構RNA模板的變性,實現全長cDNA的合成。
5、保真性:RNA反轉錄為cDNA過程中的序列精確度。由于逆轉錄酶不具備3’-5’外切酶活性,因此沒有校正功能,所以合成的cDNA出錯率較高。通常,除測序對精準度要求較高外,其他情況下,反轉錄中引入的錯誤數量可忽略不計,因為cDNA中的錯誤不會被放大。
6、抗抑制能力:當模板純度較低、抑制物較多時,抗抑制能力強的逆轉錄酶才能正常進行cDNA的合成。
目前使(shi)用的(de)(de)逆轉錄酶大都為MMLV(來源(yuan)于莫洛尼鼠白血病病毒)。未經改(gai)造的(de)(de)MMLV最適反應(ying)溫度為37℃,有較低的(de)(de)RNaseH活性。

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