免疫球蛋白試劑盒使用說明書

目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿、組織勻漿及相關液體樣本中免疫球蛋白的含量。

 

實驗原理：

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人免疫球蛋白水平。用純化的人免疫球蛋白捕獲抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被的微孔中依次加入人免疫球蛋白，再與HRP標記的檢測抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹底洗滌中的人免疫球蛋白呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸(xi)光度（OD值(zhi)），通過標準曲后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品線計算樣品中人免疫球蛋白含量。

 

試劑盒組成：

試劑盒組(zu)成(cheng)	48孔配(pei)置	96孔配(pei)置	保(bao)存
說明書	1份	1份
封板(ban)膜	2片(pian)	2片
密(mi)封袋	1個(ge)	1個
酶標包被板	1×48	1×96	2-8℃保存(cun)
標(biao)準品	0.3ml×6管	0.3ml×6管	2-8℃保存
酶標試劑(ji)	5 ml×1瓶(ping)	10 ml×1瓶(ping)	2-8℃保存
樣(yang)品(pin)稀(xi)釋液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶(ping)	2-8℃保存
顯色劑A液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保存
顯色劑B液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶(ping)	2-8℃保存
終(zhong)止液	3 ml×1瓶	6 ml×1瓶	2-8℃保(bao)存
20×濃(nong)縮洗滌液	15ml×1瓶	25ml×1瓶(ping)	2-8℃保存

注：標準品濃度依次為：120、60、30、15、7.5、0 pg/mL.

 

免疫球蛋白試劑盒使用說明書樣本處理及要求：

1. 血(xue)清(qing)：室(shi)溫血(xue)液自然凝固10-20分鐘，離心(xin)20分鐘左右（2000-3000轉/分）。仔細收(shou)集(ji)上清(qing)，保存過程(cheng)中如出現(xian)沉淀(dian)，應再次離心(xin)。

2. 血(xue)漿(jiang)：應(ying)根(gen)據(ju)標本的(de)要求選擇EDTA或(huo)檸檬酸鈉作為抗(kang)凝劑，混合10-20分(fen)鐘后，離心20分(fen)鐘左(zuo)右（2000-3000轉/分(fen)）。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形(xing)成，應(ying)該再次離心。

3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘(zhong)左(zuo)右(you)（2000-3000轉/分）。仔細(xi)收集上清，保存過程中如有(you)沉淀形成，應再(zai)次離心。胸腹(fu)水(shui)、腦脊液參照實行。

4. 細(xi)胞(bao)培養(yang)上(shang)清：檢(jian)測分(fen)泌性的成(cheng)(cheng)份(fen)(fen)時(shi)，用無菌管收集。離心20分(fen)鐘(zhong)左(zuo)右（2000-3000轉/分(fen)）。仔細(xi)收集上(shang)清。檢(jian)測細(xi)胞(bao)內的成(cheng)(cheng)份(fen)(fen)時(shi)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)，細(xi)胞(bao)濃(nong)度(du)達(da)到100萬/ml左(zuo)右。通過反復凍(dong)融，以使細(xi)胞(bao)破(po)壞并放出(chu)細(xi)胞(bao)內成(cheng)(cheng)份(fen)(fen)。離心20分(fen)鐘(zhong)左(zuo)右（2000-3000轉/分(fen)）。仔細(xi)收集上(shang)清。保存過程中(zhong)如有沉(chen)淀形成(cheng)(cheng)，應再次離心。

5. 組織標本：切割標本后，稱取(qu)重量。加(jia)入一(yi)定量的(de)PBS，PH7.4。用(yong)液氮迅(xun)速冷凍保存(cun)備用(yong)。標本融化后仍然保持2-8℃的(de)溫(wen)度。加(jia)入一(yi)定量的(de)PBS（PH7.4），用(yong)手工或勻漿器將標本勻漿充分(fen)。離心20分(fen)鐘左右（2000-3000轉/分(fen)）。仔細收集上清。分(fen)裝(zhuang)后一(yi)份(fen)待(dai)檢測，其余冷凍備用(yong)。

6. 標(biao)本(ben)采集后盡早進(jin)行(xing)(xing)提(ti)取，提(ti)取按相關文獻進(jin)行(xing)(xing)，提(ti)取后應盡快(kuai)進(jin)行(xing)(xing)實驗。若不能馬上(shang)進(jin)行(xing)(xing)試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

 

操作步驟

1. 標準品的加樣：設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；。

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣(yang)品(pin)10μl（樣品(pin)最終稀釋度(du)為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 加酶：每孔加入酶標試劑100μl，空白孔除外。

4. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。

5. 配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。

6. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。

7. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再(zai)加(jia)入顯色劑(ji)B50μl，輕(qing)輕(qing)震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘(zhong). 

8. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

9. 測定：以空白孔調零，450nm波長(chang)依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

 

注意事項：

1． 試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

2． 濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

3． 各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間最好控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線，最好做復孔。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大于標準品孔第一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）后再測定，計算時請最后乘以總稀釋倍數（×n×5）。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6． 底物請避光保存。

7． 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8． 所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9． 本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

 

 

 

計算：

以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，    

在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD      

值由標準曲線查出相應的濃度；再乘以稀釋      

倍數；或用標準物的濃度與OD值計算出標      

準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值      

代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋      

倍數，即為樣品的實際濃度。                  

 

   

 

試劑盒性能：

1.樣(yang)品(pin)線性回(hui)歸與(yu)預期濃度相關系(xi)數(shu)R值為(wei)0.95以上(shang)。

2.批內變異系數(shu)與批間變異系數(shu)應分別小(xiao)于10%和15% 。

免疫球蛋白試劑盒使用說明書保存條件及有效期：

1.試劑盒保存： 2-8℃。

2．有效期： 6個月