Matrigel   基底膜基質，無(wu)酚紅，Matrigel基質(zhi)會有色差變化（淡黃(huang)色到(dao)深紅色），是由(you)于酚紅和碳酸氫鹽與(yu)(yu)CO2作用引起(qi)的，但(dan)是與(yu)(yu)5％CO2平衡后(hou)色差即會減少。凍(dong)融(rong)后(hou)，輕(qing)(qing)輕(qing)(qing)搖晃試劑(ji)(ji)瓶(ping)(ping)使(shi)Matrigel分散均勻。所有操(cao)作均需在無(wu)菌(jun)環境下進行，試劑(ji)(ji)瓶(ping)(ping)瓶(ping)(ping)蓋可用70％乙醇擦拭(shi)，并自然干燥。應(ying)使(shi)用預冷的移液器以保證Matrigel呈勻漿狀。

Matrigel, Reduced Growth Factor（Matrigel RGF）是(shi)低(di)生(sheng)(sheng)長(chang)(chang)(chang)因子(zi)(zi)的(de)基質(zhi)膠(jiao)，基于標準(zhun)級(ji)別(bie)的(de)基底膜/基質(zhi)膠(jiao)進一步純化以去除其(qi)內(nei)(nei)(nei)所含的(de)生(sheng)(sheng)長(chang)(chang)(chang)因子(zi)(zi)水平，包括EGF、IGF、FGF、TGF-β 等(deng)，其(qi)中(zhong)TGF-β 由于偶聯在膠(jiao)原酶IV上和(he)/或在純化過程(cheng)中(zhong)與膠(jiao)內(nei)(nei)(nei)的(de)主要成(cheng)分(fen)聚(ju)集在一起(qi)，濃度降低(di)的(de)相(xiang)(xiang)對比較(jiao)少。本基質(zhi)膠(jiao)（低(di)生(sheng)(sheng)長(chang)(chang)(chang)因子(zi)(zi)）適(shi)用于更(geng)廣的(de)細胞(bao)培養研究，包括2D/3D培養、血管(guan)生(sheng)(sheng)成(cheng)、腫瘤細胞(bao)遷移和(he)細胞(bao)侵襲、體內(nei)(nei)(nei)腫瘤模型建立等(deng)。特別(bie)適(shi)用于對基質(zhi)成(cheng)分(fen)更(geng)為嚴格的(de)實驗，如信(xin)號轉導相(xiang)(xiang)關研究、闡釋生(sheng)(sheng)長(chang)(chang)(chang)因子(zi)(zi)功能的(de)研究或者基因表達研究等(deng)。本品(pin)為無菌制品(pin)，濃度為9-20mg/ml。
儲存條件：-20℃，有效期六個月。

 

操作指南：

BD采用技術(shu)，從富(fu)含胞(bao)外基(ji)(ji)(ji)(ji)質(zhi)(zhi)蛋(dan)白的(de)(de)EHS小鼠腫瘤中分(fen)(fen)離出BD Matrigel 基(ji)(ji)(ji)(ji)底(di)膜基(ji)(ji)(ji)(ji)質(zhi)(zhi)，其主要成(cheng)(cheng)分(fen)(fen)由層粘連(lian)蛋(dan)白，Ⅳ型膠原，巢蛋(dan)白，硫酸肝素糖蛋(dan)白等(deng)組成(cheng)(cheng)，還(huan)包含生長因子(zi)和(he)基(ji)(ji)(ji)(ji)質(zhi)(zhi)金屬蛋(dan)白酶等(deng)。BD Matrigel基(ji)(ji)(ji)(ji)底(di)膜基(ji)(ji)(ji)(ji)質(zhi)(zhi)在室溫條件(jian)下，聚合形(xing)成(cheng)(cheng)具有(you)生物學活性的(de)(de)三維基(ji)(ji)(ji)(ji)質(zhi)(zhi)，模(mo)擬體內細(xi)胞(bao)基(ji)(ji)(ji)(ji)底(di)膜的(de)(de)結(jie)構(gou)、組成(cheng)(cheng)、物理(li)特性和(he)功能，有(you)利于(yu)體外細(xi)胞(bao)的(de)(de)培養和(he)分(fen)(fen)化(hua)，以(yi)及對細(xi)胞(bao)形(xing)態(tai)、生化(hua)功能、遷移(yi)、侵染和(he)基(ji)(ji)(ji)(ji)因表達的(de)(de)研(yan)究。

 

BD Matrigel 基底膜基質(zhi)形成的(de)三維培(pei)養(yang)基質(zhi)，可(ke)促進(jin)上皮細(xi)胞(bao)(bao)(bao)、肝細(xi)胞(bao)(bao)(bao)、Sertoli細(xi)胞(bao)(bao)(bao)、黑色素(su)瘤(liu)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)、血管(guan)(guan)內(nei)皮細(xi)胞(bao)(bao)(bao)、甲狀(zhuang)腺(xian)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)及毛(mao)囊細(xi)胞(bao)(bao)(bao)等的(de)貼(tie)壁與分化。同時，Matrigel還能(neng)影響乳腺(xian)上皮細(xi)胞(bao)(bao)(bao)的(de)蛋白表達，支持外周神經的(de)新生和牛輸卵(luan)管(guan)(guan)上皮細(xi)胞(bao)(bao)(bao)的(de)分化。高濃(nong)度的(de)Matrigel適用于研究體內(nei)血管(guan)(guan)生成和腫瘤(liu)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)遷移及腫瘤(liu)模型的(de)建立等。

 

細胞可在0.5mm厚度的Matrigel基質層表面生長，也可在1mm厚度的Matrigel三維基質內生長。過度稀釋的Matrigel會形成非膠質的蛋白層，可以用于細胞貼壁，但不能用于細胞的分化研究。

注意：可將凍融后的Matrigel分裝在多個小管，所有分裝均需用預冷的凍存管，迅速冷凍并保存，避免多次凍融。

推薦包被與成膠方法：

注意：為了保證Matrigel基質膜的成膠性能與穩定性，稀釋濃度不應低于1：3，可用無血清培養基稀釋，Matrigel成膠后立即使用。

薄膠成膠方法：

     1.凍融后，用(yong)預冷(leng)的移液(ye)槍頭(tou)混勻(yun)(yun)Matrigel基質成勻(yun)(yun)漿狀。

     2.將需要使用的培養(yang)板置于冰上，加入濃度(du)為(wei)50μL/cm2生長面積的Matrigel基質(zhi)。

     3.在37℃放(fang)置30分鐘(zhong)，即可使(shi)用(yong)。

厚膠成膠方法：

     1.凍(dong)融后(hou)，用預冷的移液(ye)槍頭混勻Matrigel基質成(cheng)勻漿狀。

     2.將需要使用的培(pei)養板置于冰浴，將培(pei)養的細胞與Matrigel基質(zhi)(zhi)混合，用移液槍頭使其懸浮于基質(zhi)(zhi)中。加入(ru)濃(nong)度為150－200μL/cm2生長面積的Matrigel基質(zhi)(zhi)。

     3.在(zai)37℃放置30分鐘，可成(cheng)膠。可以(yi)加入細胞(bao)培養的基質，也可使細胞(bao)直接(jie)生長(chang)在(zai)膠表(biao)面。

薄層包被方法：

    1.凍融后，用預(yu)冷的移液(ye)槍(qiang)頭混勻(yun)(yun)Matrigel基質成勻(yun)(yun)漿狀。

    2.根據(ju)使用需要(yao)，采(cai)用無(wu)血清培養基稀釋Matrigel基質。根據(ju)實驗需要(yao)確定最佳包(bao)被(bei)濃度。

    3.將(jiang)稀釋的(de)Matrigel基(ji)質包(bao)被(bei)于所(suo)需的(de)培養器皿中，包(bao)被(bei)量至少覆蓋整個器皿的(de)生長表面。室(shi)溫(wen)下孵育1小(xiao)時。

4.去除未結合的Matrigel，用無血(xue)清(qing)培養基輕輕地沖洗。