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副溶血性弧菌//三重探針法熒光定量PCR試劑盒





副溶血性弧菌//三重探針法熒光定量(liang)PCR試劑(ji)盒

  • 商品貨號:BJ-P10234
    商品庫存: 100
  • 商品品牌:邦景/BHBT
  • 上架時間:2022-10-21
    商品點擊數:782

商品描述:

商品屬性

      本產品(pin)僅供科研(yan)使用.請勿用于(yu)醫(yi)藥,不能用于(yu)臨床治療診斷使用!

產品屬性:
產品名稱 規格 貨號
副溶血性弧菌//三重探針法熒光定量PCR試劑盒 50T BJ-P10234

實驗所需但試劑盒未包含材料:

1、1.5ml 無菌低吸附離心管
2、 96 孔 qPCR 板
3、 一次性手套
4、 1000ul 、100ul 、10ul 無菌低吸附帶濾芯移液槍頭
相關設備:
1、離心機
2、渦旋振蕩器
3、熒光定量 PCR 儀
4、 1000ul 、100ul 、10ul 移液器
特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板。
2. 引物和探針經過優化,靈敏性高。
3. 提供陽性對照,便于區分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據巴西副球孢子菌高度保守區設計,不會跟其他病毒 DNA 發
生交叉反應。
5. 本產品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 PCR 反應。
6. 本產品只能用于科研。
規格及成分:
編號 成分 規格
試劑一 2×Probe qPCR MagicMix 500 μL(本色蓋)
試劑二 熒光PCR專用模板稀釋液 1 mL(黃蓋)
試劑三 巴西副球孢子菌qPCR引物混合液 100 μL(白蓋)
試劑四 巴西副球孢子菌qPCR探針 50 μL(棕色管)
試劑五 巴西副球孢子菌探針法qPCR陽性對照(1×10E8拷貝/μL) 50 μL(紅蓋)


副溶血性弧菌//三重探針法熒光定量PCR試劑盒使用方法:
一、稀釋標準曲線樣品
(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的 DNA 片段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液,最好用帶芯槍頭,下同)。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 如果有 N 個樣品,最好設置 N+2 個提取,多出的一個是 PC(樣品制備陽性對照),一個是 NC(樣品制備陰性對照)。可以用 10μL 陽性對照的 10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為 NC。
8. 用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數 DNA 提取試劑盒兼容。
三、Probe qPCR 反應(20μL 體系,在樣品制備室進行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復,則標記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6個用于標準曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復,則標記 N+4 個 PCR管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于 PCR 陽性對照(用第 4 號管的陽性對照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
10. 在標記管(guan)中(zhong)按下表(biao)加入各成分(fen)(本表(biao)只列出一次(ci)重復。樣(yang)品(pin)管(guan)和陰性(xing)對照(zhao)設置完畢后才設置陽性(xing)對照(zhao),并且陽性(xing)對照(zhao)樣(yang)品(pin)要等所有(you)管(guan)子蓋(gai)(gai)上(shang)蓋(gai)(gai)子儲存好后最后加):

成份 N+2 個樣品管 PCR 陰性對照管 標準曲線樣品管(2-7管)
2×Probe qPCR MagicMix 10μL 10μL 各10μL
巴西副球孢子菌qPCR探針 1μL 1μL 各1μL
巴西副球孢子菌探針法qPCR引物混合液 2μL 2μL 各2μL
N+2個待測DNA模板
7μL
-- --
超純水 -- 7μL --
第7步所得標準曲線樣品稀釋液(2-7號) -- -- 各7μL(2號樣到2號管,3號樣到3號管…)

11. 蓋上蓋子后上機,按下面參數進行 PCR:

過程 溫度 時間
預變性 95℃ 3 min
PCR 反應(40 個循環) 95℃ 15 sec
60℃ 1 min(采集FAM通道的熒光信號)  

12. 如果把本試劑盒用于定量(liang)檢測(ce),則以(yi)陽(yang)性對(dui)照濃(nong)度的(de) log 值為(wei)橫(heng)軸,以(yi) Ct 值為(wei)縱軸,繪制標(biao)(biao)準(zhun)曲線。再以(yi)待測(ce)樣品的(de) Ct 值從標(biao)(biao)準(zhun)曲線上推算出(chu)(chu)樣品 RNA濃(nong)度的(de) log 值,再推算出(chu)(chu)其濃(nong)度。

副溶血性弧菌//三重探針法熒光定量PCR試劑盒四、數據處理

13. 如(ru)果(guo)(guo)把本試(shi)劑盒用于(yu)定性(xing)檢測,只判(pan)斷陽性(xing)或陰(yin)(yin)(yin)性(xing),則陰(yin)(yin)(yin)性(xing)對照 Ct 必須大于(yu)或等于(yu) 40。陽性(xing)對照必須有熒(ying)光對數增(zeng)長,有典型擴增(zeng)曲線,Ct 值應(ying)該(gai)小(xiao)于(yu)或等于(yu) 30。對待測樣(yang)(yang)品,如(ru)果(guo)(guo)其 Ct 大于(yu)或等于(yu) 40 則為(wei)陰(yin)(yin)(yin)性(xing),如(ru)果(guo)(guo)小(xiao)于(yu)或等于(yu) 35 則為(wei)陽性(xing)。如(ru)果(guo)(guo)在 35-40 之間,則重(zhong)復一次(ci)。若(ruo)重(zhong)復結果(guo)(guo) Ct值小(xiao)于(yu) 40,擴增(zeng)曲線有明顯起峰,該(gai)樣(yang)(yang)本判(pan)斷為(wei)陽性(xing),否則為(wei)陰(yin)(yin)(yin)性(xing)。

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