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布魯氏菌核酸熒光PCR檢測試劑盒(探針法)





布(bu)魯氏菌(jun)核酸熒光(guang)PCR檢測試(shi)劑盒(he)(探(tan)針法(fa))

  • 商品貨號:BJ-P7518
    商品庫存: 100
  • 商品品牌:邦景/BHBT
  • 上架時間:2022-10-21
    商品點擊數:785

商品描述:

商品屬性

      本產品僅(jin)供科研使用(yong).請勿(wu)用(yong)于醫藥,不能(neng)用(yong)于臨床治療診斷使用(yong)!

產品屬性:
產品名稱 規格 貨號
布魯氏菌核酸熒光PCR檢測試劑盒(探針法) 50T BJ-P7518

實驗所需但試劑盒未包含材料:

1、1.5ml 無菌低吸附離心管
2、 96 孔 qPCR 板
3、 一次性手套
4、 1000ul 、100ul 、10ul 無菌低吸附帶濾芯移液槍頭
相關設備:
1、離心機
2、渦旋振蕩器
3、熒光定量 PCR 儀
4、 1000ul 、100ul 、10ul 移液器
特點:
1. 即開即用,用戶只需要提供樣品 DNA 模板。
2. 引物和探針經過優化,靈敏性高。
3. 提供陽性對照,便于區分假陰性樣品。
4. 特異性高,引物是根據巴西副球孢子菌高度保守區設計,不會跟其他病毒 DNA 發
生交叉反應。
5. 本產品足夠 50 次 20μL 體系的探針法熒光定量 PCR 反應。
6. 本產品只能用于科研。
規格及成分:
編號 成分 規格
試劑一 2×Probe qPCR MagicMix 500 μL(本色蓋)
試劑二 熒光PCR專用模板稀釋液 1 mL(黃蓋)
試劑三 巴西副球孢子菌qPCR引物混合液 100 μL(白蓋)
試劑四 巴西副球孢子菌qPCR探針 50 μL(棕色管)
試劑五 巴西副球孢子菌探針法qPCR陽性對照(1×10E8拷貝/μL) 50 μL(紅蓋)


布魯氏菌核酸熒光PCR檢測試劑盒(探針法)使用方法:
一、稀釋標準曲線樣品
(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。為增加產品穩定性和避免擴散傳染性病原,本產品不提供活體樣品做陽性對照,只提供無傳染性的 DNA 片段作為陽性對照。
1. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 專用模板稀釋液,最好用帶芯槍頭,下同)。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 如果有 N 個樣品,最好設置 N+2 個提取,多出的一個是 PC(樣品制備陽性對照),一個是 NC(樣品制備陰性對照)。可以用 10μL 陽性對照的 10000倍稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次制備要求的體積一樣,以此作為PC。另外用水作為 NC。
8. 用自選方法純化樣品的 DNA,本試劑盒跟市場上大多數 DNA 提取試劑盒兼容。
三、Probe qPCR 反應(20μL 體系,在樣品制備室進行)
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復,則標記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6個用于標準曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復,則標記 N+4 個 PCR管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于 PCR 陽性對照(用第 4 號管的陽性對照稀釋液做模板)。下面只以定量分析為例描述操作步驟。
10. 在標記管中按下表加入(ru)各成分(fen)(本表只列出一次重(zhong)復(fu)。樣品(pin)管和(he)陰(yin)性對照(zhao)(zhao)設(she)置完畢后(hou)(hou)才設(she)置陽(yang)性對照(zhao)(zhao),并且陽(yang)性對照(zhao)(zhao)樣品(pin)要等所有管子(zi)蓋上(shang)蓋子(zi)儲(chu)存好后(hou)(hou)最(zui)后(hou)(hou)加):

成份 N+2 個樣品管 PCR 陰性對照管 標準曲線樣品管(2-7管)
2×Probe qPCR MagicMix 10μL 10μL 各10μL
巴西副球孢子菌qPCR探針 1μL 1μL 各1μL
巴西副球孢子菌探針法qPCR引物混合液 2μL 2μL 各2μL
N+2個待測DNA模板
7μL
-- --
超純水 -- 7μL --
第7步所得標準曲線樣品稀釋液(2-7號) -- -- 各7μL(2號樣到2號管,3號樣到3號管…)

11. 蓋上蓋子后上機,按下面參數進行 PCR:

過程 溫度 時間
預變性 95℃ 3 min
PCR 反應(40 個循環) 95℃ 15 sec
60℃ 1 min(采集FAM通道的熒光信號)  

12. 如(ru)果把本試劑盒用于(yu)定量檢測,則以陽性對照(zhao)濃(nong)度(du)的 log 值(zhi)(zhi)為橫軸,以 Ct 值(zhi)(zhi)為縱(zong)軸,繪制標(biao)準曲(qu)線。再(zai)以待(dai)測樣品的 Ct 值(zhi)(zhi)從標(biao)準曲(qu)線上推算(suan)出樣品 RNA濃(nong)度(du)的 log 值(zhi)(zhi),再(zai)推算(suan)出其(qi)濃(nong)度(du)。

布魯氏菌核酸熒光PCR檢測試劑盒(探針法)四、數據處理

13. 如(ru)果(guo)(guo)把本(ben)試劑盒用于(yu)(yu)定性(xing)檢測,只判斷陽(yang)性(xing)或陰性(xing),則陰性(xing)對照 Ct 必須大(da)(da)于(yu)(yu)或等于(yu)(yu) 40。陽(yang)性(xing)對照必須有熒光對數(shu)增長,有典型擴(kuo)增曲(qu)線(xian),Ct 值應該小于(yu)(yu)或等于(yu)(yu) 30。對待測樣品,如(ru)果(guo)(guo)其 Ct 大(da)(da)于(yu)(yu)或等于(yu)(yu) 40 則為(wei)陰性(xing),如(ru)果(guo)(guo)小于(yu)(yu)或等于(yu)(yu) 35 則為(wei)陽(yang)性(xing)。如(ru)果(guo)(guo)在 35-40 之間,則重復一次。若重復結果(guo)(guo) Ct值小于(yu)(yu) 40,擴(kuo)增曲(qu)線(xian)有明顯起峰,該樣本(ben)判斷為(wei)陽(yang)性(xing),否則為(wei)陰性(xing)。

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