特點優勢(shi)：

1.  特異性：所有產品使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析，經過GenBank及自建龐大數據庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段，可實現對xi 菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到佳 。

    2.   重(zhong)現性：該系列所有產(chan)品(pin)均經(jing)過(guo)大量實驗菌株的驗證，重(zhong)現性為佳(jia) 。

    3.   靈敏(min)性：該系列產品(pin)可實(shi)現對檢測(ce)菌的(de)高靈敏(min)檢測(ce)，當(dang)樣品(pin)中xi 菌的(de)濃度達到103cfu/ml時，可實(shi)現對其的(de)直接檢測(ce)，無需(xu)繁瑣的(de)增菌過程。

    4.   實用性：檢(jian)(jian)測(ce)(ce)范圍廣，涵(han)蓋了(le)對(dui)人體(ti)危害(hai)較為嚴重的17種呼吸道(dao)及(ji)(ji)腸道(dao)致病菌，可實現對(dui)臨床樣品及(ji)(ji)其他(ta)環境取(qu)樣的快速檢(jian)(jian)測(ce)(ce)，整個檢(jian)(jian)測(ce)(ce)過(guo)程為3-4個小時。

  ;  5.   優勢1：序(xu)列資源豐富(fu)，除GenBank公(gong)布(bu)的序(xu)列外，公(gong)司還進行(xing)了(le)大量菌(jun)株的序(xu)列破譯，從(cong)理(li)論上保證所選引物具(ju)有良好的保守性和特異性。

    6.   優勢2：該(gai)系列試(shi)劑(ji)盒均經過大量的保守(shou)性(xing)(xing)及特異性(xing)(xing)實驗驗證(zheng)(zheng)，憑借(jie)公(gong)司擁(yong)有的豐(feng)富的菌(jun)種資源(yuan)，每一種檢測試(shi)劑(ji)盒均經過了(le)20余種標(biao)準(zhun)菌(jun)株(zhu)和臨床菌(jun)株(zhu)的保守(shou)性(xing)(xing)驗證(zheng)(zheng)及40余種近緣標(biao)準(zhun)菌(jun)株(zhu)和臨床菌(jun)株(zhu)的特異性(xing)(xing)驗證(zheng)(zheng)，確保在使用過程中不(bu)會出現任(ren)何的假陽性(xing)(xing)及假陰性(xing)(xing)報告結果(guo)。

RNA和DNA提取(qu)：

裂解：裂解公式可能因您要提取 DNA 還是 RNA 而異，但共同點是含有高濃度離液鹽的裂解緩沖液。

Chaotropes（離液(ye)劑）的作(zuo)用(yong)：Chaotrope會(hui)破壞氫鍵及(ji)疏水間的相互作(zuo)用(yong)。離液(ye)鹽包括鹽酸(suan)胍(gua)、硫qing酸(suan)胍(gua)、尿素和高lv酸(suan)鋰。

洗滌劑：除了離液劑外，裂解緩沖液中通常還有一些去污劑，以幫助蛋白質溶解和裂解。

溶jun酶和蛋白酶K:根據樣品類型，也可以使用酶進行裂解。

提取步驟：

1.從(cong)負八十冰箱取出樣(yang)品，放置(zhi)于冰上緩慢解凍； （提前預冷離(li)心(xin)機至4度）

2.待(dai)解凍后(hou)（紅(hong)色），加(jia)入(ru)200 μl氯仿(fang)（加(jia)入(ru)lv仿(fang)體積為Trizol體積的1/5），劇烈(lie)震蕩（乳白(bai)紅(hong)色），冰上靜置10 min。 （氯仿(fang)為有(you)機溶劑(ji)，有(you)效的使有(you)機相(xiang)和無機相(xiang)迅(xun)速分離(li)(li)。有(you)機相(xiang)中(zhong)主要(yao)是酚和蛋白(bai)結合，從而使得蛋白(bai)和RNA脫離(li)(li)，RNA進入(ru)水相(xiang)。）

3.放置于預冷離心機，離心（4度，12000 rpm，15 min），離心后可見明顯分三層(ceng)(ceng)（上層(ceng)(ceng)無色透明水相為(wei)RNA層(ceng)(ceng)，中間很(hen)薄的乳白色為(wei)DNA層(ceng)(ceng)，下層(ceng)(ceng)為(wei)紅色為(wei)蛋(dan)白層(ceng)(ceng)）。

4.小心緩慢吸(xi)取上清，約400 μl（寧可(ke)少(shao)吸(xi)，也不要多吸(xi)取），置(zhi)(zhi)于另一(yi)個新的1.5 ml RNase-free EP管中，加入等體積的異丙醇，上下顛倒混(hun)勻，常溫靜置(zhi)(zhi)放置(zhi)(zhi)15 min。

5.離心（4度，12000 rpm，15 min），可見白色(se)沉(chen)淀（有時細胞較少看不到沉(chen)淀，可放置(zhi)負(fu)(fu)二十(shi)或負(fu)(fu)八十(shi)兩小時再(zai)繼續后面(mian)步驟）

6.棄上清，每(mei)管加(jia)入950 ul 75% 乙醇，上下顛(dian)倒混(hun)勻（切記(ji)不要用槍吹打混(hun)勻，這樣會造成(cheng)RNA溶解）。

7.離心（4度，12000 rpm，10 min），可見底部明(ming)顯白色沉淀。

8.離心后，棄(qi)掉上清，放入(ru)離心機再次瞬離，用10 μl 的移(yi)液器洗去殘留(liu)液體(ti)， 開蓋晾干（約5 min）。

9.每個樣品根據(ju)沉淀(dian)大小加入適量DEPC水（一(yi)般20~30 μl，有時看(kan)不到沉淀(dian)，可加10 μl DEPC水溶(rong)解），吹打溶(rong)解RNA，十(shi)一(yi)樓酶標(biao)儀(yi)測濃度，OD值（260/280=1.8-2.0）標(biao)記，負(fu)八(ba)十(shi)保存。

備注：對于中性粒細胞提取RNA建議細胞數目大于2x106/樣品；

備注：操作過程中佩戴口罩。

PCR反應五要素(su)：
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物： 引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。

設計引物應遵(zun)循以(yi)下(xia)原則：
①引物長度： 15-30bp，常用為20bp左右。
②引物擴增(zeng)跨度： 以200-500bp為宜，特定(ding)條件下可擴增(zeng)長至10kb的片段。
③引物堿基(ji)：G+C含量以(yi)40-60%為宜，G+C太少擴增(zeng)效果(guo)不佳，G+C過多易出現非特(te)異條帶(dai)。ATGC好隨機分布，避免5個以(yi)上的嘌呤或嘧啶核苷(gan)酸(suan)的成(cheng)串(chuan)排列。
④避免引(yin)物(wu)內部出現二級結(jie)構，避免兩條引(yin)物(wu)間互補，特別是3’端的互補，否則會形成引(yin)物(wu)二聚體(ti)，產(chan)生非(fei)特異的擴增(zeng)條帶(dai)。
⑤引物(wu)3’端的堿基，特(te)別是 末(mo)及倒數 個(ge)堿基，應嚴格要求(qiu)配(pei)對(dui)，以避免因末(mo)端堿基不配(pei)對(dui)而導致PCR失敗(bai)。
⑥引(yin)物(wu)中有或能(neng)加上合適的酶切(qie)位點，被擴增的靶序列 有適宜的酶切(qie)位點，這對酶切(qie)分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的(de)特異性：引物應與核酸(suan)序列數據庫的(de)其它(ta)序列無明顯同源性。

注意事項: 

1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

2.各步加(jia)樣(yang)均(jun)應使用加(jia)樣(yang)器，并(bing)經常校對其準確性，以(yi)避(bi)免試驗(yan)誤(wu)差。一次加(jia)樣(yang)時間控制在5分鐘內，如(ru)標本(ben)數(shu)量(liang)多，推薦使用排槍加(jia)樣(yang)。

3.請(qing)(qing)每次測(ce)定(ding)的同時做(zuo)標準曲(qu)線，做(zuo)復孔(kong)(kong)。如標本(ben)中待測(ce)物質含量過(guo)高（樣本(ben)OD值大于標準品孔(kong)(kong)di一(yi)孔(kong)(kong)的OD值），請(qing)(qing)先用樣品稀釋液稀釋一(yi)定(ding)倍數(shu)（n倍）后(hou)再測(ce)定(ding)，計算時請(qing)(qing)再乘以總稀釋倍數(shu)（×n×5）。

4.封板膜只(zhi)限一次性使用(yong)，以避免交叉污染。

5.底物請避(bi)光保存。

6.嚴(yan)格按照說(shuo)明(ming)書的操作(zuo)進行，試驗(yan)結果(guo)判定必須(xu)以酶標儀讀(du)數為(wei)準.

7.所有(you)樣(yang)品，洗滌液和各種廢(fei)棄物都應按(an)傳(chuan)染物處理。

8.本試劑不同批(pi)號組分不得混用。

9.不能使用過期產品。

10. 如與英文(wen)說(shuo)明書有異，以(yi)英文(wen)說(shuo)明書為準。