特點優勢：

1.  特異性：所有產品使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析，經過GenBank及自建龐大數據庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段，可實現對xi 菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到佳 。

    2.   重(zhong)現(xian)性：該系列(lie)所(suo)有產(chan)品均(jun)經過大(da)量(liang)實(shi)驗菌株的驗證，重(zhong)現(xian)性為佳 。

    3.   靈(ling)敏(min)性：該系列產品可實現(xian)對檢測(ce)菌的高靈(ling)敏(min)檢測(ce)，當樣品中xi 菌的濃(nong)度達到103cfu/ml時，可實現(xian)對其的直接(jie)檢測(ce)，無(wu)需繁瑣(suo)的增(zeng)菌過程。

    4.   實用(yong)性：檢測(ce)(ce)范圍廣，涵蓋了對人體(ti)危害較為嚴重的(de)17種呼吸道及(ji)腸(chang)道致病菌(jun)，可實現對臨床樣(yang)品及(ji)其他環境取樣(yang)的(de)快速檢測(ce)(ce)，整個(ge)檢測(ce)(ce)過程為3-4個(ge)小時。

    5.   優勢1：序列(lie)資源(yuan)豐富，除(chu)GenBank公(gong)布的序列(lie)外，公(gong)司(si)還進行了(le)大量菌(jun)株的序列(lie)破譯(yi)，從理論上保(bao)證所選(xuan)引物具(ju)有(you)良好的保(bao)守性和特異性。

    6.   優(you)勢(shi)2：該系列試劑盒(he)均經過大量(liang)的(de)(de)保(bao)(bao)守性及(ji)特異性實驗驗證(zheng)，憑(ping)借公司擁有的(de)(de)豐富(fu)的(de)(de)菌(jun)(jun)種資源(yuan)，每一(yi)種檢測試劑盒(he)均經過了(le)20余(yu)種標準菌(jun)(jun)株和(he)臨(lin)床菌(jun)(jun)株的(de)(de)保(bao)(bao)守性驗證(zheng)及(ji)40余(yu)種近緣標準菌(jun)(jun)株和(he)臨(lin)床菌(jun)(jun)株的(de)(de)特異性驗證(zheng)，確保(bao)(bao)在使用過程中不會出現任何的(de)(de)假(jia)陽性及(ji)假(jia)陰性報告結果。

RNA和(he)DNA提取：

裂解：裂解公式可能因您要提取 DNA 還是 RNA 而異，但共同點是含有高濃度離液鹽的裂解緩沖液。

Chaotropes（離液劑）的作用：Chaotrope會(hui)破壞氫鍵及疏水間(jian)的相(xiang)互作用。離液鹽(yan)包括鹽(yan)酸胍、硫qing酸胍、尿素和高lv酸鋰。

洗滌劑：除了離液劑外，裂解緩沖液中通常還有一些去污劑，以幫助蛋白質溶解和裂解。

溶jun酶和蛋白酶K:根據樣品類型，也可以使用酶進行裂解。

提取步驟：

1.從負八十冰(bing)箱(xiang)取出樣(yang)品(pin)，放(fang)置于冰(bing)上緩慢解凍； （提前預冷離心(xin)機至(zhi)4度）

2.待(dai)解凍(dong)后（紅(hong)色(se)），加(jia)入200 μl氯仿(fang)（加(jia)入lv仿(fang)體積為Trizol體積的(de)1/5），劇(ju)烈震蕩（乳白紅(hong)色(se)），冰(bing)上靜置10 min。 （氯仿(fang)為有(you)(you)機(ji)溶劑，有(you)(you)效的(de)使有(you)(you)機(ji)相(xiang)和無機(ji)相(xiang)迅(xun)速(su)分離。有(you)(you)機(ji)相(xiang)中主要是(shi)酚和蛋(dan)白結(jie)合，從(cong)而(er)使得蛋(dan)白和RNA脫離，RNA進入水相(xiang)。）

3.放(fang)置(zhi)于(yu)預冷離(li)心(xin)(xin)機，離(li)心(xin)(xin)（4度，12000 rpm，15 min），離(li)心(xin)(xin)后可見明顯分三層(ceng)(ceng)（上層(ceng)(ceng)無色(se)透明水相為RNA層(ceng)(ceng)，中(zhong)間很薄的乳白色(se)為DNA層(ceng)(ceng)，下層(ceng)(ceng)為紅色(se)為蛋白層(ceng)(ceng)）。

4.小(xiao)心(xin)緩慢吸取上清，約400 μl（寧可少吸，也不(bu)要多吸取），置于另(ling)一(yi)個新(xin)的(de)(de)1.5 ml RNase-free EP管(guan)中，加入(ru)等體積(ji)的(de)(de)異丙醇(chun)，上下顛倒混勻，常溫靜置放置15 min。

5.離心（4度，12000 rpm，15 min），可(ke)見白色沉淀(dian)（有時細胞較少(shao)看不到沉淀(dian)，可(ke)放(fang)置負(fu)(fu)二十(shi)或負(fu)(fu)八十(shi)兩小時再繼續后面步驟）

6.棄上(shang)清，每管加入950 ul 75% 乙醇，上(shang)下顛倒混勻（切記不要用槍吹打混勻，這樣會造(zao)成RNA溶(rong)解）。

7.離(li)心（4度，12000 rpm，10 min），可(ke)見底部明顯白色沉(chen)淀。

8.離(li)心后(hou)，棄(qi)掉上清，放入離(li)心機再(zai)次(ci)瞬(shun)離(li)，用10 μl 的移液器(qi)洗去殘留液體(ti)， 開蓋晾干（約5 min）。

9.每個樣(yang)品根據沉淀(dian)大小加入適量DEPC水(shui)（一般(ban)20~30 μl，有時看不到沉淀(dian)，可(ke)加10 μl DEPC水(shui)溶解），吹打溶解RNA，十一樓酶標(biao)儀測濃度，OD值（260/280=1.8-2.0）標(biao)記(ji)，負八(ba)十保存(cun)。

備注：對于中性粒細胞提取RNA建議細胞數目大于2x106/樣品；

備注：操作過程中佩戴口罩。

PCR反(fan)應五要(yao)素：
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物： 引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。

設計引物應遵循以(yi)下(xia)原(yuan)則：
①引物長度： 15-30bp，常用為(wei)20bp左右。
②引物擴增(zeng)跨度(du)： 以200-500bp為宜，特(te)定條(tiao)件下可擴增(zeng)長至10kb的片段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴增效果不(bu)佳，G+C過多(duo)易出現非特(te)異條帶。ATGC好隨機分布，避免5個(ge)以上的嘌(piao)呤或嘧啶核苷酸的成串(chuan)排列。
④避免(mian)引物內部出現二級結構，避免(mian)兩條引物間(jian)互補，特(te)別是(shi)3’端的(de)互補，否則會形成引物二聚體，產(chan)生非(fei)特(te)異(yi)的(de)擴增條帶。
⑤引物(wu)3’端的堿(jian)基(ji)，特別是 末及倒數 個堿(jian)基(ji)，應嚴格要求(qiu)配對，以(yi)避免因末端堿(jian)基(ji)不(bu)配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或(huo)能(neng)加(jia)上合適的酶切位(wei)點，被擴增的靶序列 有適宜的酶切位(wei)點，這對酶切分(fen)(fen)析或(huo)分(fen)(fen)子克隆很(hen)有好處。
⑦引(yin)物的特異性：引(yin)物應與(yu)核酸序(xu)列數據庫的其它序(xu)列無(wu)明(ming)顯同源性。

注意事項: 

1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

2.各(ge)步(bu)加(jia)樣均應使用加(jia)樣器(qi)，并經常校(xiao)對(dui)其準確性，以(yi)避(bi)免試驗誤(wu)差。一次(ci)加(jia)樣時間控(kong)制在5分(fen)鐘(zhong)內，如(ru)標本數量多，推薦使用排槍加(jia)樣。

3.請每次測定的(de)同時做標準(zhun)曲線，做復孔。如標本(ben)(ben)中待測物質(zhi)含量過(guo)高（樣本(ben)(ben)OD值大于標準(zhun)品(pin)孔di一孔的(de)OD值），請先(xian)用樣品(pin)稀(xi)釋(shi)液(ye)稀(xi)釋(shi)一定倍(bei)數(shu)（n倍(bei)）后再測定，計(ji)算時請再乘以總稀(xi)釋(shi)倍(bei)數(shu)（×n×5）。

4.封板膜只限一(yi)次性使用，以避(bi)免交叉污染。

5.底物請避光保(bao)存。

6.嚴(yan)格按照說明書的操(cao)作進行，試驗結(jie)果判定(ding)必(bi)須以酶標(biao)儀讀(du)數為(wei)準(zhun).

7.所有樣品，洗滌液和各(ge)種(zhong)廢(fei)棄物(wu)都應(ying)按傳染物(wu)處理。

8.本試劑(ji)不同批號組分不得混用。

9.不能使用(yong)過期產品。

10. 如與英文說明書有異，以英文說明書為(wei)準。