特點優勢：

1.  特異性：所有產品使用的引物均經過詳盡的生物信息學分析，經過GenBank及自建龐大數據庫的比對，確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區段，可實現對xi 菌種屬及血清型的特異檢測，特異性均達到佳 。

    2.   重現性：該系列所(suo)有產(chan)品均經(jing)過大(da)量實驗菌(jun)株的驗證，重現性為佳 。

    3.   靈(ling)敏(min)性：該系列(lie)產品可(ke)實現對檢測(ce)菌的高靈(ling)敏(min)檢測(ce)，當樣品中xi 菌的濃度達到103cfu/ml時(shi)，可(ke)實現對其的直接檢測(ce)，無需繁瑣(suo)的增菌過程。

    4.   實用性(xing)：檢測范圍廣，涵蓋了對人體危害較為(wei)嚴(yan)重的(de)17種(zhong)呼吸道及(ji)腸道致病菌(jun)，可實現對臨床樣品及(ji)其他環境取樣的(de)快速檢測，整個檢測過程為(wei)3-4個小時(shi)。

    5.   優勢1：序列資源豐富，除GenBank公(gong)布(bu)的(de)序列外，公(gong)司還進行了大(da)量菌株的(de)序列破譯，從理論上保(bao)(bao)證所選引(yin)物具有良好的(de)保(bao)(bao)守(shou)性和特異性。

    6.   優(you)勢2：該系列(lie)試劑(ji)(ji)盒均經過(guo)大量的(de)(de)(de)保守性及(ji)特異(yi)性實驗(yan)驗(yan)證(zheng)，憑借公司擁(yong)有的(de)(de)(de)豐富的(de)(de)(de)菌種(zhong)資(zi)源，每一種(zhong)檢測試劑(ji)(ji)盒均經過(guo)了20余(yu)種(zhong)標準菌株(zhu)(zhu)和臨床菌株(zhu)(zhu)的(de)(de)(de)保守性驗(yan)證(zheng)及(ji)40余(yu)種(zhong)近緣標準菌株(zhu)(zhu)和臨床菌株(zhu)(zhu)的(de)(de)(de)特異(yi)性驗(yan)證(zheng)，確保在使(shi)用(yong)過(guo)程中不會出現任何的(de)(de)(de)假陽性及(ji)假陰(yin)性報告結(jie)果。

RNA和DNA提取：

裂解：裂解公式可能因您要提取 DNA 還是 RNA 而異，但共同點是含有高濃度離液鹽的裂解緩沖液。

Chaotropes（離液劑）的作(zuo)用：Chaotrope會破(po)壞(huai)氫鍵及疏水(shui)間的相(xiang)互作(zuo)用。離液鹽(yan)包括鹽(yan)酸(suan)胍、硫qing酸(suan)胍、尿素(su)和高(gao)lv酸(suan)鋰(li)。

洗滌劑：除了離液劑外，裂解緩沖液中通常還有一些去污劑，以幫助蛋白質溶解和裂解。

溶jun酶和蛋白酶K:根據樣品類型，也可以使用酶進行裂解。

提取步驟：

1.從(cong)負八(ba)十冰箱取出樣品(pin)，放置于冰上緩慢解凍； （提前(qian)預冷離心機至4度）

2.待解凍后（紅色），加(jia)入200 μl氯(lv)仿(fang)（加(jia)入lv仿(fang)體積(ji)為(wei)Trizol體積(ji)的(de)1/5），劇烈震蕩（乳(ru)白紅色），冰上靜置(zhi)10 min。 （氯(lv)仿(fang)為(wei)有機溶劑，有效的(de)使(shi)有機相(xiang)(xiang)和無機相(xiang)(xiang)迅(xun)速分離。有機相(xiang)(xiang)中主要是酚和蛋白結(jie)合，從而使(shi)得蛋白和RNA脫離，RNA進入水相(xiang)(xiang)。）

3.放置(zhi)于預冷離(li)心(xin)(xin)機，離(li)心(xin)(xin)（4度，12000 rpm，15 min），離(li)心(xin)(xin)后可(ke)見明顯分三層(ceng)（上層(ceng)無色透明水相為(wei)RNA層(ceng)，中間很薄的乳白色為(wei)DNA層(ceng)，下層(ceng)為(wei)紅色為(wei)蛋白層(ceng)）。

4.小心緩慢吸取(qu)上清，約400 μl（寧(ning)可(ke)少吸，也不要多吸取(qu)），置(zhi)(zhi)于另一個(ge)新(xin)的1.5 ml RNase-free EP管中，加入(ru)等體積的異丙醇，上下顛倒混勻，常溫靜置(zhi)(zhi)放置(zhi)(zhi)15 min。

5.離心（4度(du)，12000 rpm，15 min），可(ke)見白(bai)色(se)沉淀(dian)（有時(shi)細胞較少看不到沉淀(dian)，可(ke)放置負二十(shi)或負八十(shi)兩小時(shi)再繼續(xu)后面步(bu)驟）

6.棄上清(qing)，每管加(jia)入950 ul 75% 乙醇，上下顛倒混勻（切記不要用槍(qiang)吹打混勻，這(zhe)樣(yang)會造(zao)成(cheng)RNA溶解）。

7.離(li)心（4度(du)，12000 rpm，10 min），可見底部明顯白色沉淀。

8.離心后，棄(qi)掉(diao)上清，放入(ru)離心機再次瞬離，用10 μl 的移液器洗(xi)去殘留液體， 開蓋(gai)晾干（約5 min）。

9.每(mei)個樣品根據沉淀大(da)小加(jia)入適量DEPC水（一(yi)般(ban)20~30 μl，有(you)時看不到(dao)沉淀，可加(jia)10 μl DEPC水溶解），吹打溶解RNA，十(shi)一(yi)樓(lou)酶(mei)標儀測濃度，OD值（260/280=1.8-2.0）標記，負(fu)八(ba)十(shi)保存。

備注：對于中性粒細胞提取RNA建議細胞數目大于2x106/樣品；

備注：操作過程中佩戴口罩。

PCR反應五要(yao)素：
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物： 引物是PCR特異性反應的關鍵，PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上，只要知道任何一段模板DNA序列，就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物，利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。

設計引物應(ying)遵循(xun)以下原(yuan)則(ze)：
①引物長度： 15-30bp，常(chang)用為(wei)20bp左右。
②引物擴(kuo)增跨度： 以200-500bp為(wei)宜(yi)，特定條件(jian)下可擴(kuo)增長至10kb的片(pian)段。
③引物堿基：G+C含量以40-60%為宜，G+C太少擴(kuo)增效果不佳，G+C過多(duo)易出現非特異條帶。ATGC好隨(sui)機分布，避免5個以上的(de)嘌呤或(huo)嘧啶核(he)苷酸(suan)的(de)成(cheng)串排列。
④避(bi)免引(yin)物(wu)(wu)內(nei)部出現二級結構，避(bi)免兩條引(yin)物(wu)(wu)間互(hu)補，特(te)別是3’端的(de)互(hu)補，否則會形成(cheng)引(yin)物(wu)(wu)二聚體，產(chan)生非(fei)特(te)異的(de)擴增條帶。
⑤引(yin)物3’端的(de)堿基(ji)(ji)，特別是 末及倒數(shu) 個堿基(ji)(ji)，應(ying)嚴格(ge)要求配(pei)(pei)對，以避免因末端堿基(ji)(ji)不配(pei)(pei)對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能(neng)加上(shang)合適的(de)酶(mei)(mei)切位(wei)(wei)點(dian)，被擴增的(de)靶序列(lie) 有適宜(yi)的(de)酶(mei)(mei)切位(wei)(wei)點(dian)，這對(dui)酶(mei)(mei)切分析(xi)或分子克隆很有好處。
⑦引物的特(te)異性(xing)：引物應與核(he)酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性(xing)。

注意事項: 

1.試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

2.各步(bu)加(jia)樣均應使用加(jia)樣器，并經常校(xiao)對其準確性，以避免試驗誤差。一次(ci)加(jia)樣時間控制在5分鐘(zhong)內(nei)，如標(biao)本數量多，推(tui)薦使用排槍加(jia)樣。

3.請每次測(ce)定(ding)的同時(shi)(shi)做標準(zhun)曲線，做復孔。如標本中待測(ce)物(wu)質含(han)量過(guo)高（樣本OD值大于(yu)標準(zhun)品孔di一孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定(ding)倍數(shu)（n倍）后再測(ce)定(ding)，計算時(shi)(shi)請再乘以總(zong)稀釋倍數(shu)（×n×5）。

4.封板膜(mo)只(zhi)限一次性使用，以避免交叉污染。

5.底物請避光保(bao)存。

6.嚴格按照說明書的(de)操作(zuo)進行，試驗結果判定(ding)必須以酶標儀讀(du)數為準.

7.所有樣(yang)品，洗滌(di)液和各種(zhong)廢棄物都應按傳染物處理。

8.本試劑不同批號組分(fen)不得混用。

9.不(bu)能使用過期產(chan)品。

10. 如(ru)與英(ying)文說(shuo)(shuo)明書有異，以英(ying)文說(shuo)(shuo)明書為準。