TRzol LS（液體樣本 RNA 提取試劑）

商品屬性：

產品名稱	規格	貨號
TRzol LS（液體樣(yang)本(ben) RNA 提取(qu)試劑）	50ml×2	BJ-PJ6323

商品介紹：
儲存條件：
TRzol LS 在(zai)(zai)室溫下(xia)能穩定保存(cun) 12 個月。盡管如此，為達到最佳效果，我們建議保存(cun)在(zai)(zai) 2-8°C 的環境下(xia)。
重要提示：
有毒物接(jie)觸(chu)皮膚或者(zhe)不慎吞服，會導(dao)致灼傷。一旦接(jie)觸(chu)皮膚后立即以大量的洗滌劑和清水清洗。若(ruo)感不適(shi)，看醫(yi)生(sheng)并尋(xun)求(qiu)苯酚和其他(ta)成分的正(zheng)確治(zhi)療方案(an)。
產品介紹：

TRzol LS試劑是直(zhi)接(jie)從細(xi)胞或組織(zhi)中(zhong)提(ti)取總RNA的(de)(de)(de)(de)試劑。它在破碎和溶(rong)解細(xi)胞時能(neng)保(bao)持(chi)RNA的(de)(de)(de)(de)完整性(xing)(xing)。加入氯仿后(hou)離(li)心，樣品分成(cheng)水(shui)樣層(ceng)、中(zhong)間層(ceng)和有(you)機層(ceng)。RNA存在于(yu)(yu)(yu)(yu)水(shui)樣層(ceng)中(zhong)。收集上面(mian)的(de)(de)(de)(de)的(de)(de)(de)(de)水(shui)樣層(ceng)后(hou)，RNA可(ke)以通過異(yi)丙(bing)醇沉淀來回收。無論是人、動物(wu)、植物(wu)還是細(xi)菌，該(gai)方法(fa)對少(shao)量(liang)及大量(liang)的(de)(de)(de)(de)組織(zhi)和細(xi)胞均(jun)有(you)較好(hao)的(de)(de)(de)(de)分離(li)效(xiao)果。TRzol LS 試劑操作上的(de)(de)(de)(de)簡(jian)單(dan)性(xing)(xing)允許同時處理(li)多個樣品。所有(you)的(de)(de)(de)(de)操作可(ke)以在一小(xiao)時內(nei)完成(cheng)。TRzol 抽提(ti)的(de)(de)(de)(de)總 RNA 能(neng)夠避免DNA 和蛋白的(de)(de)(de)(de)污染(ran)，可(ke)用于(yu)(yu)(yu)(yu) RNA 印跡分析(xi)、斑點雜交、poly(A)+篩(shai)選、體外(wai)翻譯(yi)、RNA 酶(mei)保(bao)護分析(xi)和分子克(ke)隆(long)。如果是用于(yu)(yu)(yu)(yu) PCR，當兩條引物(wu)位于(yu)(yu)(yu)(yu)單(dan)一外(wai)顯子內(nei)時，建議用擴增(zeng)級的(de)(de)(de)(de)DNase I 來處理(li)抽提(ti)的(de)(de)(de)(de)總RNA。

 

注意事項：
1.從(cong)少量的組(zu)織(zhi)(zhi)(1~10mg)或細胞(bao)(10 2-10 4 個)中分離RNA 樣(yang)品：往組(zu)織(zhi)(zhi)或細胞(bao)中加 入 800µl TRzol。待樣(yang)品裂解(jie)后，加入氯仿(fang)并進行步驟 2 中的抽提操(cao)作。在(zai)用異(yi)丙醇(chun)沉 淀 RNA 之前(qian)，加入 5~10μg 無(wu) RNA 酶的glycogen 作為水樣(yang)層(ceng)的載體。為降(jiang)低其黏度 在(zai)加入氯仿(fang)前(qian)用 26 號注射器抽吸兩(liang)次以切斷基因組(zu)DNA。Glycogen 會(hui)留在(zai)水樣(yang)層(ceng)中 并和 RNA 共析出。在(zai)濃縮到(dao) 4mg/ml 之前(qian)它不會(hui)抑制逆轉錄反(fan)應第一鏈的合成也(ye)不會(hui) 抑制 PCR。 

2.在勻(yun)漿(jiang)化后和加(jia)入氯仿之前，樣品可(ke)以(yi)在-60℃或者-70℃保存(cun)至少(shao)一個月。將 RNA 沉(chen)淀(dian)溶(rong)于 75%的乙醇在 2-8℃至少(shao)可(ke)以(yi)保存(cun)一周，在-5—-20℃下(xia)至少(shao)可(ke)保存(cun)一年。 

3.用 TRzol LS 抽提 RNA 時要戴手套和護眼罩。避免接觸皮膚和衣服。在化學通 風櫥完成操作。避免呼吸道吸入。如無例外，室溫保持在 15~30℃的條件下。

自備試劑： 

氯仿 、 異丙醇(chun)、75%乙醇(chun)(RNase-Free water 配制)、RNase-Free water（將水加(jia)入(ru) 無(wu) RNA 酶的(de)玻璃瓶(ping)中，加(jia)入(ru) DEPC 至 0.1% (V/V)。放置過(guo)夜并高壓滅(mie)菌）。0.5% SDS 溶液(RNase-Free water 配制)（可選）。

操作步驟： 

1.樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)預處理(li) a.生物(wu)液(ye)體(ti)(ti)(ti)(ti) 每(mei)(mei)0.25ml液(ye)體(ti)(ti)(ti)(ti)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)(血清，血漿(jiang)等等)加(jia)(jia)(jia)(jia)入0.75ml TRzol LS，用(yong)(yong)加(jia)(jia)(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)槍吹打液(ye)體(ti)(ti)(ti)(ti)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin) 幾(ji)次(ci)以幫助裂解(jie)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)中(zhong)(zhong)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)。每(mei)(mei)5~10×10 6個細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)至(zhi)少加(jia)(jia)(jia)(jia)入0.75ml TRzol LS。對于(yu)含有高 污(wu)染物(wu)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)如(ru)全血樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)，可以用(yong)(yong)滅菌(jun)水(shui)按照1：1比例(li)稀(xi)(xi)釋一倍后開始提取(qu)。TRzol LS 和液(ye)體(ti)(ti)(ti)(ti)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)的(de)(de)(de)終體(ti)(ti)(ti)(ti)積(ji)(ji)(ji)比總(zong)是3：1。 b.組織(zhi)(zhi) 用(yong)(yong)glass或強力(li)勻漿(jiang)器攪勻組織(zhi)(zhi)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)，每(mei)(mei)50~100mg組織(zhi)(zhi)或者0.25ml組織(zhi)(zhi)懸液(ye)加(jia)(jia)(jia)(jia) 0.75ml的(de)(de)(de)TRzol LS。一般50~100mg組織(zhi)(zhi)體(ti)(ti)(ti)(ti)積(ji)(ji)(ji)都要小于(yu)0.25ml，如(ru)果(guo)組織(zhi)(zhi)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)的(de)(de)(de)體(ti)(ti)(ti)(ti)積(ji)(ji)(ji)小 于(yu)0.25ml，加(jia)(jia)(jia)(jia)入滅菌(jun)水(shui)將組織(zhi)(zhi)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)體(ti)(ti)(ti)(ti)積(ji)(ji)(ji)調(diao)整到0.25ml以保證體(ti)(ti)(ti)(ti)積(ji)(ji)(ji)比例(li)是3：1。 c.單層生長的(de)(de)(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao) 直接往(wang)直徑3.5 cm的(de)(de)(de)培(pei)(pei)(pei)養板(ban)(ban)中(zhong)(zhong)加(jia)(jia)(jia)(jia)入0.3ml-0.4ml的(de)(de)(de)TRzol LS溶解(jie)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，用(yong)(yong)加(jia)(jia)(jia)(jia)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)槍吹打 幫助充(chong)分裂解(jie)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)。依(yi)據培(pei)(pei)(pei)養板(ban)(ban)的(de)(de)(de)面積(ji)(ji)(ji)而不是依(yi)據細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)的(de)(de)(de)數量(liang)(liang)來決定所(suo)需(xu)的(de)(de)(de)TRzol LS 量(liang)(liang) （每(mei)(mei)10cm2加(jia)(jia)(jia)(jia)0.3-0.4ml）。不需(xu)要往(wang)裂解(jie)物(wu)里(li)面加(jia)(jia)(jia)(jia)水(shui)，因(yin)為培(pei)(pei)(pei)養板(ban)(ban)中(zhong)(zhong)附著殘留的(de)(de)(de)培(pei)(pei)(pei)養液(ye) 已(yi)經(jing)充(chong)分稀(xi)(xi)釋了TRzol LS 。 d.懸浮生長的(de)(de)(de)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao) 通(tong)過離心(xin)來沉淀(dian)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)。在TRzol LS試劑中(zhong)(zhong)用(yong)(yong)移(yi)液(ye)管反復吹打來裂解(jie)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)。每(mei)(mei) 5~10×10 6的(de)(de)(de)動物(wu)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，植(zhi)物(wu)或酵母(mu)菌(jun)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)或每(mei)(mei)1×10 7細(xi)(xi)菌(jun)加(jia)(jia)(jia)(jia)0.75ml的(de)(de)(de)TRzol LS。和步驟 b 一樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)用(yong)(yong)滅菌(jun)水(shui)調(diao)節樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)體(ti)(ti)(ti)(ti)積(ji)(ji)(ji)到0.25ml。在加(jia)(jia)(jia)(jia)入TRzol LS前應避免洗(xi)滌細(xi)(xi)胞(bao)(bao)(bao)，因(yin)為那 樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)會(hui)增加(jia)(jia)(jia)(jia)mRNA降解(jie)的(de)(de)(de)可能性(xing)。破(po)裂某些(xie)酵母(mu)菌(jun)和細(xi)(xi)菌(jun)可能需(xu)要使用(yong)(yong)勻漿(jiang)器。 2.分離階段 將勻漿(jiang)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)在15-30°C條件下(xia)孵育(yu)5min以使核蛋白(bai)體(ti)(ti)(ti)(ti)完全分解(jie)。每(mei)(mei)0.75ml TRzol LS 加(jia)(jia)(jia)(jia)0.2ml氯(lv)仿(fang)。蓋緊(jin)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)品(pin)管蓋，用(yong)(yong)手用(yong)(yong)力(li)搖晃試管15秒并將其在室溫下(xia)孵育(yu)2~15 min。 在2~8°C下(xia)以不超(chao)過12,000×g的(de)(de)(de)離心(xin)力(li)高速(su)冷凍(dong)離心(xin)15 min。離心(xin)后混合物(wu)分成(cheng)三層： 下(xia)層苯酚-氯(lv)仿(fang)層，中(zhong)(zhong)間層，上層無(wu)色的(de)(de)(de)水(shui)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)層。RNA無(wu)一例(li)外地存在于(yu)水(shui)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)層當中(zhong)(zhong)。 水(shui)樣(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)(yang)層的(de)(de)(de)容量(liang)(liang)大約為所(suo)加(jia)(jia)(jia)(jia)TRzol LS 容量(liang)(liang)的(de)(de)(de)70%。 

2.RNA 的(de)沉(chen)淀(dian) 將(jiang)水樣層(ceng)轉移到一干凈(jing)的(de)試管(guan)中，如果希望(wang)分離(li)(li)(li)(li)DNA和蛋白，有機(ji)層(ceng)和中間層(ceng)同 樣要予(yu)以保(bao)留。通(tong)(tong)過(guo)將(jiang)水樣層(ceng)和異(yi)丙醇混(hun)合(he)來沉(chen)淀(dian)RNA。每0.75ml TRzol LS對應0.5ml 異(yi)丙醇。將(jiang)混(hun)合(he)的(de)樣品在(zai)(zai)15-30°C條件(jian)下(xia)孵育10min并在(zai)(zai)2~8°C下(xia)以不超過(guo)12,000×g的(de)離(li)(li)(li)(li) 心(xin)(xin)力高速冷(leng)凍離(li)(li)(li)(li)心(xin)(xin)10 min。RNA沉(chen)淀(dian)在(zai)(zai)離(li)(li)(li)(li)心(xin)(xin)前通(tong)(tong)常不可見，離(li)(li)(li)(li)心(xin)(xin)后會形成(cheng)一膠狀片狀 沉(chen)淀(dian)附著于試管(guan)壁和管(guan)底。 

3.RNA 的(de)(de)漂(piao)洗 移去上層懸液。用75%的(de)(de)乙醇(RNase-Free water配制)洗滌RNA沉(chen)淀一次，每0.75ml 的(de)(de)TRzol LS至少(shao)加1ml的(de)(de)75%乙醇。旋渦振蕩混合樣品并在2~8°C下以不超過7,500×;g的(de)(de) 離心力(li)高速冷凍離心5 min。 

4.RNA 的(de)再(zai)(zai)溶(rong)解(jie) 室溫簡單干(gan)燥 RNA 沉(chen)(chen)淀(dian)，不要(yao)(yao)(yao)在真空管里離(li)心(xin)干(gan)燥 RNA。尤為重要(yao)(yao)(yao)的(de)是，不能(neng)讓 RNA 沉(chen)(chen)淀(dian)完全干(gan)燥那樣(yang)會(hui)極(ji)大地降低它的(de)可溶(rong)性。部分(fen)溶(rong)解(jie)的(de) RNA 樣(yang)品其 OD260 /OD280 比值<1.6 。用移(yi)液管分(fen)幾次移(yi)取 RNase-Free water 或 0.5%SDS 溶(rong)液 (RNase-Free water 配制)來(lai)溶(rong)解(jie)RNA（如果(guo)RNA 以后要(yao)(yao)(yao)用于(yu)酶切反應時，避免使用SDS。） RNA 還能(neng)被 100%甲酰胺(an)（除去離(li)子）再(zai)(zai)溶(rong)解(jie)并保存在-70°C。