EASYspin 組織 / 細胞 RNA 快速提取試劑盒 (DNase I)

商品(pin)屬性：

產品名(ming)稱	規格	貨號
EASYspin 組織 / 細胞 RNA 快速提取試劑盒 (DNase I)	50 次	BJ-PJ6326

商品介紹：

保存條件：本試劑盒在室(shi)溫(wen)儲存(cun) 12 個月不影響(xiang)使用效果。
產品介紹：
獨特的裂解液/β-巰基(ji)乙醇迅(xun)速裂解細胞(bao)和(he)滅活細胞(bao) RNA 酶，然后用(yong)乙醇調節(jie)結 合條(tiao)件后,RNA 在高離(li)序鹽(yan)狀態下選擇(ze)性吸附于離(li)心(xin)柱內硅基(ji)質(zhi)膜，再(zai)通過一系(xi)列快速 的漂(piao)洗(xi)－離(li)心(xin)的步驟，去蛋(dan)(dan)白液和(he)漂(piao)洗(xi)液將細胞(bao)代謝(xie)物，蛋(dan)(dan)白等雜(za)質(zhi)去除，最后低鹽(yan) 的 RNase free H2O 將純凈 RNA 從硅基(ji)質(zhi)膜上洗(xi)脫。
自備試劑：乙醇, β-巰基乙醇
注意事項：
1.需要(yao)自備一次性(xing)注(zhu)射器，研(yan)缽。裂解液(ye)RLT和去(qu)蛋白(bai)液(ye)RW1中含有刺激性(xing)化合物，操 作時要(yao)戴乳膠手(shou)套，避免沾染皮(pi)膚，眼(yan)(yan)睛和衣服。若沾染皮(pi)膚、眼(yan)(yan)睛時，要(yao)用大量清(qing) 水或者生理鹽水沖(chong)洗(xi)。
2.關于(yu)DNA 的微量殘留：
一(yi)般說來(lai)任何(he)總 RNA 提取試劑在(zai)提取過程中(zhong)無(wu)法完全避免(mian) DNA 的(de)(de)微量(liang)殘留， 本公司的(de)(de) EASYspin 系列 RNA 提取產(chan)品，在(zai)大(da)多數 RT-PCR 擴(kuo)(kuo)增過程中(zhong)極其微量(liang)的(de)(de) DNA 殘留（一(yi)般電泳 EB 染(ran)色紫外燈下觀察不可見）影響不是很(hen)大(da)，如果要進行(xing)嚴 格的(de)(de) mRNA 表達量(liang)分析如熒(ying)光定量(liang) PCR，我們建議在(zai)進行(xing)模板和引物(wu)的(de)(de)選(xuan)擇(ze)時： 1）選(xuan)用跨(kua)內含(han)子的(de)(de)引物(wu)，以穿過 mRNA 中(zhong)的(de)(de)連接區，這樣 DNA 就不能作為(wei)模板參與 擴(kuo)(kuo)增反(fan)應。 2）選(xuan)擇(ze)基因組(zu) DNA 和 cDNA 上擴(kuo)(kuo)增的(de)(de)產(chan)物(wu)大(da)小不一(yi)樣的(de)(de)引物(wu)對。

 操作步驟：
提示：
? 第一次使用前請先在漂洗液 RW 瓶和 70%乙醇瓶中加入指定量無水乙醇!
? 操作前在裂解液 RLT 中加入β-巰基乙醇至終濃度 1%，如 1 ml RLT 中加入 10 μl β- 巰基乙醇。此裂解液最好現用現配。配好的 RLT 4℃可放置一個月。
1.組織培養細胞
a.收集<107懸浮細胞到一個 1.5 ml 離心管，對于貼壁細胞，孔板培養可以直接裂解，細胞瓶培養應該先用胰蛋白酶消化后吹打下來收集。
b.12,000 rpm 離心 10 sec（或者 300×g 離心 5 min），使細胞沉淀下來。完全吸棄上清，留下細胞團，注意不完全棄上清會稀釋裂解液導致產量純度降低。
c.輕彈管壁將細胞沉淀完全松散重懸，加入 350 μl（<5×106 細胞）或者 600 μl（5×106-1×107細胞）裂解液RLT，吹打混勻后用手劇烈振蕩 20 sec，充分裂解。
d.用帶鈍針頭的一次性 1 ml(配 0.9 mm 針頭) 注射器抽打裂解物 5-10 次或直到得到滿意勻漿結果（或者電動勻漿 30 sec），可以剪切 DNA，降低粘稠度和提高產量。
e.接操作步驟項下 3。
2.動物組織（例如鼠肝腦）
a.電動勻漿：新鮮組織用解剖刀迅速切成小碎塊，加入 350 μl(<20 mg 組織)或者600 μl(20-30 mg 組織)的裂解液 RLT 后電動徹底勻漿 20-40 sec。
b.液氮研磨+勻漿：在液氮中研磨組織成細粉后，取適量組織細粉(20 mg/30 mg)轉入裝有 350 μl/600 μl 組織裂解液 RLT 的 1.5 ml 離心管中，用手劇烈振蕩 20 sec，充分裂解。用帶鈍針頭的一次性 1 ml(配 0.9 mm 針頭) 注射器抽打裂解物 10 次或直到得到滿意勻漿結果（或者電動勻漿 30 sec），可以剪切 DNA，降低粘稠度和提高產量。
c.將勻漿后裂解物 12,000 rpm 離心 3 min，沉淀可能存在的裂解困難的碎片或者不溶物，將裂解物上清小心轉到一個新離心管。
d.接操作步驟項下 3。
3.較精確估計裂解物（上清）體積，加入等體積的 70%乙醇（請先檢查是否已加入無水乙醇!），此時可能出現沉淀，但是不影響提取過程，立即吹打混勻，不要離心。
4.立刻將混合物（每次小于 700 μl，多可以分兩次加入）加入一個吸附柱 RA 中（吸附柱放入收集管中），12,000 rpm 離心 60 sec，棄掉廢液。
5.加 350 μl 去蛋白液 RW1，室溫放置 30 sec，12,000 rpm 離心 30 sec，棄掉廢液。將吸附柱 RA 放回收集管中。
6.DNase I 工作液的配制：取 10 μl DNase I 儲存液放入新的 RNase-free 離心管中，加入70 μl RDD 溶液，輕柔混勻。
7.向吸附柱 RA 中央加入 80 μl DNase I 工作液，室溫放置 15 min（一般情況下室溫放置可得到較好的消化效果，如果室溫效果不佳可選擇在 37℃放置 15 min）。
8.加 350 μl 去蛋白液 RW1，室溫放置 30 sec，12,000 rpm 離心 30 sec，棄掉廢液。將吸附柱 RA 放回收集管中。
9.加入 500 μl 漂洗液 RW（請先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000 rpm 離心 30 sec，棄掉廢液。加入 500 μl 漂洗液 RW，重復一遍。
10.將吸附柱 RA 放回空收集管中，12,000 rpm 離心 2 min，將吸附柱置于室溫放置數分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液。
11.取出吸附柱 RA，放入一個 RNase free 離心管中，根據預期 RNA 產量在吸附膜的中間部位加 30-50 μl RNase free H2O（事先在 65℃水浴中加熱效果更好）， 室溫放置 1 min，12,000 rpm 離心 1 min。