pBM28 Toposmart Cloning Kit（gateway系統入門 TOPO克隆載體）

商品(pin)屬性：

產品名(ming)稱	規格	貨號
pBM28 Toposmart Cloning Kit（gateway系統入門 TOPO克隆載體）	20 次 ×3	BJ-PJ6528

商品介紹：

保存條件：-20℃ 保存
產品介紹：
利用痘苗(miao)病毒的(de)拓撲(pu)異構(gou)酶I(Topoisomerase I)的(de)切割再連接(jie)的(de)特(te)點(dian)將PCR產物(wu)定向克(ke)
隆到線性化的pBM28載體中。適用于克隆由Pfu、sPfu、KOD、Xerox、Phusion和(he)Q5 等高(gao)
保真(zhen)DNA聚合酶擴增的平(ping)末端PCR產(chan)物。pBM28 載體類似于invitrogen公(gong)司的pENTR/DTOPO入門(men)載體， 具有attL1 和attL2，為(wei)gateway系統(tong)中(zhong)的入門(men)載體。引物M13F(-21)和
M13R可(ke)用于菌(jun)落PCR和(he)測序鑒(jian)定(ding)。
產品特點：
（1）連(lian)接反應僅需 5 分鐘。
（2）只(zhi)適(shi)合平末端 PCR 產物的快速、高(gao)效、定向克隆(long)。
（3）載體采用(yong)了新(xin)的制備工藝，零背景，無需(xu)藍白斑篩選。
（4）與(yu)pBM27載體(ti)相比，pBM28載體(ti)無標(biao)簽序列。
（5）載體為壯觀(guan)霉素抗性。
注意事項：
（1）引(yin)物要求：PCR 引(yin)物5’端不能進行磷酸化修飾，普通商業化引(yin)物即可。上游引(yin)物的5’ 端添(tian)加CACC 四個堿基（CACC 為真核(he)表達所必需的 Kozak 序列）。
（2）DNA 聚合(he)酶：選用Pfu、sPfu、Phusion、Q5、KOD 和Xerox 等高保(bao)真DNA 聚合(he)酶用
于PCR 擴增。
（3）連接(jie)時間：5-15 分鐘(zhong)，一般(ban)為 15 分鐘(zhong)。
（4）連接溫度：室溫 (22℃-37℃)，可使用(yong)PCR儀控溫。最佳反應溫度為25℃。若片段(duan)有
高GC等復雜(za)結(jie)構，可(ke)在(zai)37℃反應。
（5）產(chan)物(wu)要求：為保(bao)證PCR產(chan)物(wu)完整，建議72℃后延伸5-10分鐘。