pBM40 Toposmart Cloning Kit（TOPO克隆載體 真核表達）

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產品名稱	規格	貨號(hao)
pBM40 Toposmart Cloning Kit（TOPO克隆載體 真核表達）	20 次	BJ-PJ6531

商品介紹：

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產品介紹：
利用痘苗病(bing)毒(du)的拓撲異構(gou)酶I(Topoisomerase I)的切割再(zai)連接的特(te)點將(jiang)PCR產物(wu)定向克(ke)隆到線性化的pBM40哺乳(ru)動物(wu)表達載體(ti)中。適用于克(ke)隆由Pfu、sPfu、KOD、Xerox、Phusion和Q5等高保真DNA聚(ju)合酶擴(kuo)增的平末(mo)端PCR產物(wu)。引物(wu)CMVforward和SV40PolyArev可(ke)用于菌落PCR和測(ce)序(xu)鑒定。
產品特點：
（1）連接反應僅(jin)需 5 分鐘(zhong)。
（2）只適(shi)合平末端 PCR 產物的快速、高效、定(ding)向克隆。
（3）載(zai)體采(cai)用(yong)了新的(de)制備工藝，零背(bei)景(jing)，無需藍(lan)白斑(ban)篩選。
（4）具有 CMV 啟動(dong)子，適用于外源基因(yin)(yin)在哺乳動(dong)物細(xi)胞中的(de)表達，帶(dai)(dai)新(xin)霉素抗性基因(yin)(yin)，便(bian)于穩轉(zhuan)細(xi)胞株的(de)篩選。C 端帶(dai)(dai) FLAG 標簽序(xu)列便(bian)于表達的(de)目的(de)蛋白(bai)質的(de)檢(jian)測。
（5）相對于 pcDNA3.1 等其它哺乳動物表達載體，pBM40載體具有更小的質(zhi)粒(li)骨架(jia)，轉(zhuan)染效(xiao)率高(gao)。
（6）載體(ti)具有(you)卡那霉素和(he)新霉素抗性。
注意事項：
（1）引物要求：PCR 引物 5’端(duan)(duan)不能進(jin)行磷酸修(xiu)飾，普通商業化引物即(ji)可。上游引物的(de)(de)(de)(de) 5’端(duan)(duan)添加 CACC 四個堿(jian)基（CACC 為真核表達所必需的(de)(de)(de)(de) Kozak 序列）。如果(guo)目的(de)(de)(de)(de)蛋白需要在(zai) C 端(duan)(duan)帶(dai) FLAG 標簽(qian)，下游引物則需要去掉基因本身(shen)的(de)(de)(de)(de)終止密(mi)碼子(zi)(zi)（3 個堿(jian)基），目的(de)(de)(de)(de)蛋白的(de)(de)(de)(de)翻譯終止由 FLAG 標簽(qian)的(de)(de)(de)(de)終止密(mi)碼子(zi)(zi) TAA（位于(yu) Xho I 酶切位點前）來(lai)實(shi)現。
（2）DNA 聚合酶(mei)：選用 Pfu、sPfu、Phusion、Q5、KOD 和 Xerox 等高保真(zhen) DNA 聚合酶(mei)用于 PCR 擴增。
（3）連接(jie)時間(jian)：5-15 分(fen)(fen)鐘，通常用(yong) 15 分(fen)(fen)鐘。
（4）連接溫(wen)(wen)度：室溫(wen)(wen) (22℃-30℃)，可(ke)使用 PCR 儀控溫(wen)(wen)。最(zui)佳(jia)反應溫(wen)(wen)度為 25℃。若片段存在高(gao) GC 等復雜結構(gou)，可(ke)在 37℃反應。