pPIC9K Seamless Cloning Kit（線性化質粒）

商(shang)品(pin)屬性：

產品名(ming)稱	規格(ge)	貨號(hao)
pPIC9K Seamless Cloning Kit（線性化質粒）	20 μl	BJ-PJ6550

商(shang)品介紹(shao)：

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產品介紹：
pPIC9K為畢(bi)(bi)赤(chi)酵(jiao)母表(biao)達載(zai)體(ti)(ti)，載(zai)體(ti)(ti)能(neng)夠使用的(de)畢(bi)(bi)赤(chi)酵(jiao)母宿主菌。 pPIC9載(zai)體(ti)(ti)大小9276 bp，是融合(he)表(biao)達載(zai)體(ti)(ti)，利(li)用alpha因子分泌信(xin)號肽(tai)，分泌表(biao)達蛋白基(ji)因。在(zai)(zai)畢(bi)(bi)赤(chi)酵(jiao)母中利(li)用HIS4進行篩選。在(zai)(zai)載(zai)體(ti)(ti)構建過程中，目的(de)基(ji)因必須(xu)保證與信(xin)號肽(tai)的(de)起始密碼子的(de)讀碼框一致。本產品提供pPIC9K經EcoRⅠ酶(mei)切后的(de)線性化載(zai)體(ti)(ti)，可用無縫克隆(long)技術將單個或(huo)多(duo)個DNA片段(duan)組裝到載(zai)體(ti)(ti)上。
無(wu)縫克隆(long)(long)(long)技(ji)術可在重組酶(mei)的(de)(de)作用下，只(zhi)需一步反應，便可將片(pian)(pian)段克隆(long)(long)(long)到任(ren)何載體中的(de)(de)任(ren)意位置，得到重組質粒。無(wu)縫克隆(long)(long)(long)技(ji)術作為一種(zhong)非常強大的(de)(de)克隆(long)(long)(long)技(ji)術，具有快速、簡便、高效、多(duo)(duo)片(pian)(pian)段組裝(zhuang)和定向克隆(long)(long)(long)等(deng)特點，用于單個DNA片(pian)(pian)段的(de)(de)克隆(long)(long)(long)，多(duo)(duo)個DNA片(pian)(pian)段組裝(zhuang)克隆(long)(long)(long)以及(ji)多(duo)(duo)位點突變構(gou)建等(deng)實驗目的(de)(de)。
產品特點：
1. pPIC9K為(wei)畢赤(chi)酵母(mu)(mu)表達載體，載體能夠(gou)使用(yong)的畢赤(chi)酵母(mu)(mu)宿主(zhu)菌。
2. pPIC9載體利用alpha因(yin)子分泌信號(hao)肽，分泌表(biao)達蛋白基因(yin)。
3. 在畢赤(chi)酵(jiao)母中利用HIS4進行篩選。
4. 無縫(feng)克隆技術只需要簡(jian)單的 PCR 擴增(zeng)就(jiu)可以(yi)制備片段DNA。
5. 可(ke)以克隆長片段和(he)多片段DNA。
操作步驟：
1. pPIC9K線性化載(zai)體(ti)使用方(fang)法：
(1) pPIC9K線性(xing)化載體當做克隆載體使用，可(ke)以(yi)在擴(kuo)增PCR產物的
上(shang)游引物 5’端添加序列：GAGAGGCTGAAGCTTACGTAGAATTC
下游引物 5’端添(tian)加序(xu)列：GCGAATTAATTCGCGGCCGC
通過(guo)無縫克隆連接到pPIC9K中。
(2) 測序(xu)引物
AOX1-F:GACTGGTTCCAATTGACAAGC或alpha-Factor-F:TACTATTGCCAGCATTGCTGCAOX1-R:GCAAATGGCATTCTGACATCC
(3) pPIC9K線性化(hua)載體為 EcoRⅠ酶(mei)切后的線性化(hua)載體，圖(tu)譜(pu)及多克隆位(wei)點見下圖(tu)。