HotStart Bst4.2 大規格(125ml包裝酶)

商品屬性(xing)：

產(chan)品名稱	規格	貨號(hao)
HotStart Bst4.2 大規格(125ml包裝酶)	100萬U	BJ-PJ6564

商(shang)品(pin)介紹(shao)：

描述：

Bst4.2 DNA/RNA Polymerase 經酶電子重構架和進化篩選（in silico Design & invitro Evolution），其為Bst4.0 的升級品，通用于 DNA 或 RNA 的 LAMP 或RT-LAMP 擴增。
性能提升包括 ：

（1 ）Bst 4.2 全(quan)(quan)系包含(han) 熱啟動Aptamer，該配體(ti)確(que)保酶在(zai)<30℃時(shi)，酶活(huo)封閉(bi)效率(lv)>95%,在(zai)>60℃時(shi) 1min 內完(wan)全(quan)(quan)釋(shi)放酶活(huo)。該特(te)性(xing)利于室溫建立反應體(ti)系，并大(da)幅降低了低溫條件下的非(fei)特(te)異(yi)擴(kuo)增；

（2）反(fan)應溫度提升(sheng)到 70℃，大(da)幅降低(di)引物(wu) Dimer 的形成，提高擴(kuo)增特異性，并使得粗樣品(pin)核酸釋放更加充分；

（3）全系包含 Helicaser，因此，允許在不使用 F3/B3 引物的情況下進行 LAMP 擴增（easy LAMP），并允許 FIP/BIP 的引物用量降低一倍。這將進一步降低非特異擴增，并使得擴增均一性大幅提升。

注意： HotStart Bst 4.2 DNA/RNA Polymerase（8U/μl）不含有甘油，可用于凍干體系的建立。
儲存：長期保存請置于-20℃以下（12 個月有效）；制品反復凍融 10 次不影響性能，但應避免反復凍融；制品由于含有高濃度的糖組分，-20℃保存的酶制品，在融化時可能會有結晶物，此時在 30℃的溫度下融化，過高的溫度可能會導致熱啟動性能下降。一經融化推薦置于 2-8℃保存，在此條件下制品穩定儲存 6 個月。
特殊說明：
（1） Bst4.2 DNA/RNA Polymerase 在用于 LAMP 擴增時的推薦反應溫度為 65-70℃，最佳反應溫度為 70℃。因此其可完全替代  的 Bst4.0 系列，用于標準 LAMP的擴增。
（2） 由于 Helicaser 的反應溫度為 70℃，因此在進行eLAMP 擴增時，反應溫度為 70℃。
1. 標準 LAMP 擴增
1.1 10xLAMP Primer Mix：FIP/BIP=16 μM each; LF/LB=4
μM each; F3/B3=2 μM each
1.2 配制 LAMP 反應體系
10xBst4.2 Buffer(Mg2+ free) 2.5 μl
100mM Mg2+
1.5 μl
dNTP Mixture（10 mM each） 3 μl
10xLAMP Primer Mix 2.5 μl
HotStart Bst 4.2（8U/μl） 1 μl
模板 DNA/RNA X μl
ddH2O 到總體積 25 μl
1.3 反應體系配好后，置于 65-70°C 反應 20~30min。
2. eLAMP 擴增
2.1 10xeLAMP Primer Mix ： FIP/BIP=8 μM each;
LF/LB=4 μM each。
注意：eLAMP（easy LAMP）為去除 F3/B3 引物的方法，為 Bst4.2 系列專用的使用策略，對于大多數引物組，在Helicaser 的加持下，擴增速度幾乎不受影響。如引物擴增效率低，可提高 FIP/BIP 濃度到 12~16uM。
2.2 配制 eLAMP 反應體系
10xBst4.2 Buffer(Mg2+ free) 2.5 μl
100mM Mg2+
1.5 μl
dNTP Mixture（10 mM each） 3 μl
10xeLAMP Primer Mix 2.5 μl
HotStart Bst 4.2（8U/μl） 1 μl
模板 DNA/RNA X μl
ddH2O 到總體積 25 μl
2.3 eLAMP 的擴增溫度為 70°C，反應 20~30min。
其它注意事項
(1) 制品中包含高濃度的鹽組分，使用時做好個人防護，防止制品與皮膚、眼、鼻、呼吸道等接觸和吸入，一旦接觸或吸入，請用大量的清水沖洗。
(2) 防止氣(qi)溶膠污染，盡可能進(jin)行分區(qu)操作(zuo)。