LAMP Loop DP-Probe (訂制品)

商品(pin)屬性：

產品名(ming)稱(cheng)	規格	貨號
LAMP Loop DP-Probe (訂制品)	800Tx25μl	BJ-PJ6578

商(shang)品(pin)介紹：

描述：

該 DP-Probe(DisPlaceable Probe)為鏈置換熒光探針，專用于LAMP 的熒光擴增。Loop DP-Probe 在搭配 HotStart Bst4.2 Basic 試劑時表現出極為出色的特異性，可以大幅降低非特異性擴增。LoopDP-Probe Pair 是將 Loop 引物進行改造（LF/B 任意一條均可），其由兩條標記引物退火組成：熒光猝滅引物（5’IBFQ+Tail+Loop）和熒光報告引物（Tail 互補區+3’發光基團），其不發熒光。在 LAMP反應中 Loop 引物滲入到“啞鈴”結構，由擴增返回“啞鈴”延伸并置換游離的熒光報告引物，累積產生熒光信號。詳細的原理可參考文獻 PMID: 33626039。有經驗的研究人員可根據參考文獻自行制備 LAMP Loop DP-Probe Pair，經驗不足的人員可委托  來制備， 提供三種熒光標記的探針。需要客戶提供 Loop 序列，并指明需要的熒光標記（FAM/JOE/ROX）。

eLAMP DP-Probe 試劑的開發簡述
1. 引物的粗篩選
無論是變色、試紙條、熒光法 eLAMP 試劑的開發，前期的測試過程， 推薦采用價格較低的液體 HotStart Bst4.2 SYBR Green試劑（進行粗篩選。通常篩選的引物為 3-5 組。10xeLAMP Mix：FIP/BIP=8 μM each; LF/LB=4 μM each.測試樣品：10e3、100、25、10Copies/管，NTC(16-32 重復)
2.5xBst4.2 SYBR Green Mix 10 μl
10x ePrimer Mix 2.5 μl
HotStart Bst 4.2（8U/μl） 1 μl
模板 DNA/RNA X μlddH2O 到總體積 25 μl置于 70°C 反應 45min，1min 收集一次熒光信(xin)號。

良好的引物組具有 以 下 特 性 (Ct) ：

10e3copies =5-10min; 25copies <15min;10Copies<20min, NTC 均>40min. 以上實驗需要反復確認，以確
保核心引物的工作效率，否則重新篩選，再進行后續的其它測試。
2. Loop DP-Probe Pair 的制備
根據上(shang)述(shu)引物組的(de)篩選情況，選取最佳引物組。在(zai)此基礎上(shang)改造(zao)LF 或 LB，改造(zao)哪(na)一條(tiao)效果更佳，必須經過測(ce)試。下(xia)面以改造(zao) LF為例進(jin)行(xing)說明。 通(tong)常提(ti)供 25x 的(de) LF DP-Probe Pair（或自行(xing)制備）。

注意：

（1）測試(shi)試(shi)劑更改(gai)為 HotStart Bst4.2 Basic 試(shi)劑。

（2）10xeLAMP Mix 引物濃度有調整。
10xeLAMP Mix：FIP/BIP=8 μM each; LB=4 μM；LF=3 μM.
2.5xBst4.2 Basic Mix 10 μl
10x ePrimer Mix 2.5 μl
25x LF DP-Probe Pair 1 μl
HotStart Bst 4.2（8U/μl） 1 μl
模板 DNA/RNA X μl
ddH2O 到總體積 25 μl
置于 70°C 反應 45min，1min 收集(ji)一次熒光(guang)信號（注意根據探針熒光(guang)標記(ji)，選取(qu)正確的熒光(guang)通道）。與 SYBR Green 結果相比來(lai)看，時間會滯(zhi)后(hou) 1-3min。NTC 的控(kong)制會明顯(xian)提(ti)升。

此時可進一步做后續的其它項目測試。
3. 如有試劑凍干制備的需求可采用如下幾種方案：
（1）(液體試劑)+PrimerMix 自行凍干（專業人員使用）。
（2）PrimerMix+(引物凍干劑)自行凍干，加入 (凍干球)。
（3）（HotStart Bst4.2），全程自行凍干（專業人員使用）。
（4）委托  進行全體系凍干。