RAPA3G植物組織直擴PCR試劑盒

商品屬性(xing)：

產品名稱(cheng)	規格	貨號
RAPA3G植物組織直擴PCR試劑盒	80T(50 μl 體系)	BJ-PJ6590

商(shang)品介(jie)紹：

描 述 ：

RAPA3G DNA 聚(ju)合酶(mei)為經電子重構架的第三(san)代(dai)(dai) Taq DNA 聚(ju)合酶(mei)，第三(san)代(dai)(dai) DNA 聚(ju)合酶(mei)具有(you)高度的雜質耐(nai)受性、 長片(pian)段擴(kuo)(kuo)增(zeng)能(neng)力、高擴(kuo)(kuo)增(zeng)成(cheng)功率、高產(chan)(chan)量，這些(xie)特點(dian)使得 RAPA3G 系列產(chan)(chan)品(pin)可用(yong)(yong)于粗制樣品(pin)的直接(jie)擴(kuo)(kuo)增(zeng)，無需核酸純 化步驟。該 PCR Mix 具有(you) 5’-3’的聚(ju)合酶(mei)活性、5’-3’的外切 酶(mei)活性、3’-5’的外切酶(mei)活性，產(chan)(chan)物部分(fen)帶有(you)”A“尾巴，部 分(fen)為平(ping)末端(duan)，因此產(chan)(chan)物可用(yong)(yong)于 TA 克隆或平(ping)端(duan)克隆。 

特點和用途：
（1）高雜質耐受性：該 PCR Mix 可直接使用多糖多酚含量極高的葉片等材料進行 PCR 擴增，無需基因組提取。
（2）高效的快速 DNA 釋放劑：盡管該 PCR Mix 可以直接使用葉片進行擴增，但我們仍然推薦采用 DNA 釋放劑進行樣本的快速前處理（約需要 5min，可高通量操作）。DNA 釋放劑的前處理，使得制備的 DNA 模板可以進行多次、多基因擴增，并長期保存植物 DNA，經 DNA 釋放劑處理的樣本，在室溫條件下放置 1 個月，無任何后續影響，-20 可長期保存。
（3） 快速 PCR：該酶具有 6kb/min 以上的擴增速度，可顯著的縮短 PCR 的擴增時間，在常規測試條件下，10s 的延伸時間可完成 1kb 的基因組 DNA 擴增。
（4）粗制樣品的擴增能力：擴增能力>1.7kb。
（5） 高保真性能：該制品包含一定比例的 RAPA HiFi 超保真 DNA 聚合酶，因此其具有一定的保真性能（經藍白斑測試，其保真性能約為 Taq DNA 聚合酶的 56 倍）。
（6）熱啟動，防止非特異性擴增：RAPA3G 系列產品均采用 專有的熱啟動技術，確保 50 度以下完全無活性，僅有 95 度加熱 5min 以后才能恢復其活性，因此可最大限度的提高擴增的特異性，減少非特異性產物的產生。
包裝：
2×RAPA3G PCR Mix (with Dye) 1mlX2
快速 DNA 釋放劑 A 20 ml
快速 DNA 釋放劑 B 20 ml
儲存：長期儲存置于-20°C 以下，可保存 2 年；短期使用置于 4°C（3 個月）保存。
使用方法
1. DNA 釋放
（1）采用加熱法：取 2-3mm 直徑葉片（白 Tip 頭上沿大小）、1-10mg 果實等材料，放入到 0.2ml EP 管中，加入 50 μl 快速 DNA 釋放劑 A，于 PCR 儀中 98°C 加熱 5min，加熱完畢后加入 50 μl 快速 DNA 釋放劑 B，混合均勻，即可使用。
（2）采用鋼珠研磨法：取 2-3mm 直徑葉片、1-10mg 果實等材料，放入到 2ml EP 管中，加入 250 μl 快速 DNA 釋放劑 A 和 2-3 粒鋼珠，研磨 1-2min 成漿體裝。研磨完畢后加入 250 μl 快速 DNA 釋放劑 B，混合均勻，即可使用。
2. 按下表配制 PCR 反應體系并混合均勻：
2×RAPA3G PCR Mix (with Dye) 25 μl
上游引物(10 μM) 2 μl
下游引物(10 μM) 2 μl
步驟 1 制備的模板 DNA 2 μl
ddH2O 19 μl
注意：當擴增片段>5kb 時，引物用量調整為 0.25-0.5μl。
3. PCR 擴增循環參數
循環數 溫度 時間
預變性 95°C 5min
25-40 Cycles
95°C 20s
50~60°C 20s
72°C 4-6kb/min
末延伸 72°C 2min
請注意：（1）該制品為熱啟動制品預變性步驟 5min 不可縮短，否則 DNA 聚合酶無法恢復活性。（2）當擴增片段<1kb時，延伸時間使用 15s；擴增片段 1-2kb 時,延伸時間使用45s，擴增片段 2-3kb 時,延伸時間使用 1min，當擴增片段>3kb 時，請按照 2kb/min 的延伸時間進行設置。(3)盡管該酶具有 6kb/min 的延伸速度，但按照 2kb/min 設置延伸時間的條件下，能獲得最高的產量。
3. 注意事項：(1) 當模(mo)板 GC 含量>70%時(shi)，請添加5× Q-Solution（Cat. No.: A3002）。(2)當采用(yong)全血、血漿等(deng)蛋(dan)白含量極高的樣本時(shi)，擴增完(wan)畢后可能會有變(bian)性的蛋(dan)白沉淀，請離心后再進行點樣和(he)電(dian)泳。