RAPA3G動物組織直擴PCR試劑盒

商品屬性：

產品名稱(cheng)	規(gui)格	貨(huo)號
RAPA3G動物組織直擴PCR試劑盒	80T(50 μl 體系)	BJ-PJ6591

商(shang)品(pin)介紹：

描 述 ：

RAPA3G DNA 聚(ju)合酶(mei)(mei)為經(jing)電子重構架的(de)第(di)三(san)代 Taq DNA 聚(ju)合酶(mei)(mei)，第(di)三(san)代 DNA 聚(ju)合酶(mei)(mei)具有高度的(de)雜(za)質耐受性(xing)、 長(chang)片(pian)段(duan)擴(kuo)增(zeng)(zeng)能力、高擴(kuo)增(zeng)(zeng)成功率、高產(chan)量，這些(xie)特點使得 RAPA3G 系(xi)列產(chan)品可(ke)用于粗制(zhi)樣品的(de)直接(jie)擴(kuo)增(zeng)(zeng)，無(wu)需核酸純 化步驟。該 PCR Mix 具有 5’-3’的(de)聚(ju)合酶(mei)(mei)活(huo)性(xing)、5’-3’的(de)外切 酶(mei)(mei)活(huo)性(xing)、3’-5’的(de)外切酶(mei)(mei)活(huo)性(xing)，產(chan)物部分帶有”A“尾巴，部 分為平末端(duan)(duan)，因此產(chan)物可(ke)用于 TA 克隆或(huo)平端(duan)(duan)克隆。

特點和用途：
（1）高雜質耐受性：該 PCR Mix 可直接使用血液、蛋白含量較高的動物組織材料進行 PCR 擴增，無需基因組提取。
（2）高效的快速 DNA 釋放劑：盡管該 PCR Mix 可以直接使用組織細胞材料進行擴增，但我們仍然推薦采用 DNA 釋放劑進行樣本的快速前處理（約需要 5min，可高通量操作）。DNA 釋放劑的前處理，使得制備的 DNA 模板可以進行多次、多基因擴增，并長期保存 DNA，經 DNA 釋放劑處理的樣本，在室溫條件下放置 1 個月，無任何后續影響，-20 可長期保存。
（3）快速 PCR：該酶具有 6kb/min 以上的擴增速度，可顯著的縮短 PCR 的擴增時間，在常規測試條件下，10s 的延伸時間可完成 1kb 的基因組 DNA 擴增。
（4）粗制樣品的擴增能力：擴增能力>4kb。
（5）高保真性能：該制品包含一定比例的 RAPA HiFi 超保真 DNA 聚合酶，因此其具有一定的保真性能（經藍白斑測試，其保真性能約為 Taq DNA 聚合酶的 56 倍）。
（6）熱啟動，防止非特異性擴增：RAPA3G 系列產品均采用 專有的熱啟動技術，確保 50 度以下完全無活性，僅有 95 度加熱 5min 以后才能恢復其活性，因此可最大限度的提高擴增的特異性，減少非特異性產物的產生。
包裝：
2×RAPA3G PCR Mix (with Dye) 1ml×2
快速 DNA 釋放劑 A 20 ml
快速 DNA 釋放劑 B 20 ml
儲存：長期儲存置于-20°C 以下，可保存 2 年；短期使用置于 4°C（3 個月）保存。
使用方法
1. DNA 釋放
（1）采用加熱法：取 2-10 個毛發囊、1-10mg 動物組織等材料，放入到 0.2ml EP 管中，加入 50 μl 快速 DNA 釋放劑A，于 PCR 儀中 98°C 加熱 5min，加熱完畢后加入 50 μl快速 DNA 釋放劑 B，混合均勻，即可使用。
（2）采用鋼珠研磨法：取 1-10mg 動物組織等材料，放入到 2ml EP 管中，加入 250 μl 快速 DNA 釋放劑 A 和 2-3 粒鋼珠，研磨 1-2min 成漿體裝。研磨完畢后加入 250 μl 快速DNA 釋放劑 B，混合均勻，即可使用。
2. 按下表配制 PCR 反應體系并混合均勻：
2×RAPA3G PCR Mix (with Dye) 25 μl
上游引物(10 μM) 2 μl
下游引物(10 μM) 2 μl
步驟 1 制備的模板 DNA 2 μl
ddH2O 19 μl
注意：當擴增片段>5kb 時，引物用量調整為 0.25-0.5μl。
3. PCR 擴增循環參數
循環數 溫度 時間
預變性 95°C 5min
25-40 Cycles
95°C 20s
50~60°C 20s
72°C 4-6kb/min
末延伸 72°C 2min
請注意：（1）該制品為熱啟動制品預變性步驟 5min 不可縮短，否則 DNA 聚合酶無法恢復活性。（2）當擴增片段<1kb時，延伸時間使用 15s；擴增片段 1-2kb 時,延伸時間使用45s，擴增片段 2-3kb 時,延伸時間使用 1min，當擴增片段>3kb 時，請按照 2kb/min 的延伸時間進行設置。(3)盡管該酶具有 6kb/min 的延伸速度，但按照 2kb/min 設置延伸時間的條件下，能獲得最高的產量。
3. 注(zhu)意事項：(1) 當(dang)模板 GC 含量(liang)>70%時，請添加5× Q-Solution。(2)當(dang)采用全(quan)血、血漿等蛋白含量(liang)極高的樣本時，擴增完(wan)畢后(hou)可能會有變性的蛋白沉淀(dian)，請離心后(hou)再(zai)進行(xing)點樣和電泳。