HotStart RAPA3G DNA Polymerase(10U/ul,無甘油)

商品屬(shu)性：

產品名稱	規(gui)格(ge)	貨號
HotStart RAPA3G DNA Polymerase(10U/ul,無甘油)	1000U	BJ-PJ6597

商品介(jie)紹：

描 述 ：

末(mo)端(duan)(duan)(duan)轉(zhuan)移酶（TdT）是一(yi)種不依賴于(yu)模板(ban)的(de) DNA 聚 合(he)酶，催化脫(tuo)氧(yang)核苷(gan)酸結合(he)到 DNA 分子(zi)(zi)的(de) 3’羥基端(duan)(duan)(duan)。帶(dai)有 突(tu)出、凹陷或平滑末(mo)端(duan)(duan)(duan)的(de)單雙鏈 DNA 分子(zi)(zi)均可作為 TdT 的(de) 底物(wu)，加(jia)尾(wei)(wei)長(chang)度(du)可達 5~300nt。本酶經電子(zi)(zi)重構架(jia)技(ji)術篩選(xuan)， 使(shi)其可以(yi)在 45°C 高溫(wen)下(xia)反(fan)應(ying)，從而避免因 DNA 二(er)級結構造 成的(de)加(jia)尾(wei)(wei)效(xiao)率下(xia)降。 該酶廣泛用于(yu) DNA 的(de) 3’末(mo)端(duan)(duan)(duan)添加(jia)同聚物(wu)、利用修(xiu)飾堿 基（如 ddNTP，DIGdUTP）標記(ji) DNA 3’末(mo)端(duan)(duan)(duan)、TdT 介導的(de) dUTP 缺(que)口末(mo)端(duan)(duan)(duan)標記(ji)技(ji)術（細胞凋亡的(de)原(yuan)位檢測）等試驗。

活性定義：37 ℃ 60 分鐘內，催化 1nmol dNTP 加入到多聚核苷酸 3’羥基末端中所需的酶量定義為 1 個活性單位
熱失活：75°C 20min。
儲存：-20℃ 可保存 3 年。
注意事項
1、適量 EDTA 可使 Terminal Transferase 的活性喪失。
2、金屬離子螯合劑，較高濃度的銨根離子、氯離子、碘例子和磷酸根離子均對 Terminal Transferase 活性具有抑制作用。
3、DNA 末端(duan) mol 數的(de)計(ji)算(suan)，長度為 100bp 的(de) DNA：1pmol末端(duan) DNA=0.33ng。

HotStart RAPA3G DNA Polymerase 為第三(san)代 DNA 聚合酶(mei)(mei)，具有 5’-3’外(wai)切(qie)酶(mei)(mei)活(huo)性(xing)，不具有 3’-5’外(wai)切(qie)酶(mei)(mei)活(huo)性(xing)，其 具有最高(gao)的(de)(de)(de)雜質耐受性(xing)（對(dui)乙(yi)醇、胍(gua)鹽、肝素(su)具有極高(gao)的(de)(de)(de)耐 受性(xing)），因此對(dui)于純度較差(cha)的(de)(de)(de) DNA 模板，該酶(mei)(mei)仍然可(ke)以獲(huo)得(de) 理(li)想的(de)(de)(de)實驗結果(guo)(guo)。RAPA3G DNA 聚合酶(mei)(mei)為化學法(fa)修飾的(de)(de)(de) HotStart 版本，其在 50℃以下 100%無活(huo)性(xing)，只(zhi)有 95℃條件 下加熱 5min 后才能完全恢復酶(mei)(mei)的(de)(de)(de)活(huo)力(li)。因此該系統可(ke)以有 效(xiao)抑制(zhi)非特(te)異性(xing) PCR 擴增(zeng)，極大(da)的(de)(de)(de)提高(gao)了 PCR 擴增(zeng)特(te)異性(xing) 和靈(ling)敏度。該酶(mei)(mei)配(pei)有獨特(te)的(de)(de)(de)反應緩沖液，可(ke)在寬(kuan)范圍中(zhong)得(de)到 良(liang)好的(de)(de)(de)擴增(zeng)結果(guo)(guo)、檢測靈(ling)敏度更高(gao)、信(xin)號更強。

包裝:

 

注意：
1. 5×HotStart RAPA3G Buffer 中未添加 Mg2+,配制反應時應加入適當濃度的 Mg2+,推薦反應終濃度為 2.5 mM。
2. HotStart RAPA3G DNA Polymerase (10U/μl)中不含甘油，可用于凍干 PCR。
儲存：
請避光置于-80℃以下可保存 5 年，-20℃以下保存 2 年，經常使用請置于 4℃保存 2 個月。避免反復凍融。
使用說明：
1. 按照如下組分配制 50 μl PCR 反應體系：

注意：（1）在 50 μl 的 PCR 反應體系中 HotStart RAPA3GDNA Polymerase 的用量可在 0.1-0.5 μl 進行調整。（2）Mg2+的濃度通常在 2-4 mM 時可獲得理想的擴增結果。
2. qPCR 擴增程序用兩步法：
 Stage 1: 95℃ 5min
 Stage 2: 95℃ 10s
60℃ 30s 25-40 cycles
注意：由于該酶為化學修飾的熱啟動 RAPA3G DNA 聚合酶，必須于 95℃加熱 5min 才能恢復酶的活性，該熱啟動步驟不能縮短時間。
3. 常規 PCR 三步法程序：
 Stage 1: 95℃ 5min
 Stage 2: 95℃ 10s
 50-60℃（退火） 20s
72℃ 4kb/min 25-40 cycles
Stage 3: 72℃ 5min
注意：由于該(gai)酶(mei)為化學修飾的熱(re)啟動 RAPA3G DNA 聚合酶(mei)，必(bi)須于 95℃加熱(re) 5min 才能恢復酶(mei)的活性，該(gai)熱(re)啟動步(bu)驟不能縮短時間(jian)。