Golden MLV Reverse Transcriptase（200U/ul）

商品(pin)屬性：

產(chan)品名稱	規格	貨號
Golden MLV Reverse Transcriptase（200U/ul）	20KU	BJ-PJ6604

商品介紹：

描 述 ：

Golden MLV Reverse Transcriptase 反(fan)(fan)(fan)(fan)轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)錄(lu) 酶(mei)(mei)(mei)是在鼠源病毒(du)反(fan)(fan)(fan)(fan)轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)錄(lu)酶(mei)(mei)(mei)基礎上進行定點突變(bian)改良而(er)(er)得。該 酶(mei)(mei)(mei)去除了 RNase H 活(huo)性(xing)(xing)中，從(cong)而(er)(er)避免反(fan)(fan)(fan)(fan)轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)錄(lu)過程中降解 RNA。同時經過突變(bian)文庫篩選，使得其熱穩定性(xing)(xing)更強，可耐 受 55℃高(gao)(gao)(gao)溫反(fan)(fan)(fan)(fan)應（最佳活(huo)性(xing)(xing)溫度為 50℃）。相比(bi)于低溫條件 下反(fan)(fan)(fan)(fan)轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)錄(lu)反(fan)(fan)(fan)(fan)應，采用(yong)高(gao)(gao)(gao)溫反(fan)(fan)(fan)(fan)轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)錄(lu)可顯(xian)著打(da)開 RNA 二級結構， 從(cong)而(er)(er)提高(gao)(gao)(gao)復雜 RNA 模板的擴增(zeng)性(xing)(xing)能、提高(gao)(gao)(gao)反(fan)(fan)(fan)(fan)轉(zhuan)(zhuan)(zhuan)錄(lu) cDNA 的 長度和產量，從(cong)而(er)(er)提高(gao)(gao)(gao)后續檢(jian)測的靈敏度。 

單位定義：以 poly(rA)為模板、oligo(dT)為引物，在 37°C條件下，10 分鐘內催化 1 nmol 的 dTTP 摻入形成酸不溶性沉淀物所需要的酶量，定義為一個活性單位。
酶儲存液：20mM Tris-HCl,pH7.5, 150mM NaCl, 0.1%Tween20, 2mM DTT, 50%甘油。
儲存：-20°C 可保(bao)存 3 年。

操作方法
1. 按以下組分配制反應體系
Golden MLV Reverse Transcriptase 1 μl
10×RT Buffer 2 μl
dNTP Mixture (10 mM each) 1 μl
Total RNA or Poly(A) RNA 0.1-2 μg
20×Oligo dT(25)&Random Primer * 1 μl
RNase Inhibitor (40 U/μl) 0.2 μl
RNase Free H2O Up to 20 μl
*注：Oligo dT(25) 使用濃度為 20~50 μM, 如使用 Random9隨機引物可使用 125 μM，基因特異性引物可使用 5 μM。
2．在 PCR 儀上按下列條件進行反轉錄反應
 30°C 5 min
 *37-50°C 15~30 min
 85°C 5 min
*推薦的反轉錄溫度設置為 50°C，無論是高 GC 或長片段模板，均可獲得綜合性的 cDNA 產量。
3. 反轉錄所得的 cDNA 可直接用于 PCR 反應或儲存于-20°C。
4. 其它(ta)注(zhu)意事項：該酶(mei)可(ke)與 Taq DNA 聚合(he)酶(mei)組(zu)合(he)，用于(yu)One-Step RT-PCR，推薦的(de) RT 溫(wen)度為(wei) 50°C，RT 時間(jian)為(wei)5min，酶(mei)的(de)參(can)考(kao)用量為(wei)：終反應濃度 0.5-2U/ul。