T4 DNA 連接酶

商品屬性(xing)：

產品名稱	規格	貨號
T4 DNA 連接酶	35KU	BJ-PJ6644

商品介紹：

描述：T4 DNA Ligase 可(ke)(ke)催化相鄰 DNA 鏈(lian)的(de)(de)(de)(de) 5’-P 末(mo)(mo)(mo)端和 3’-OH 末(mo)(mo)(mo)端以(yi)磷(lin)酸二酯鍵結合的(de)(de)(de)(de)反應(ying)，需 ATP 作輔酶，不僅(jin) 可(ke)(ke)以(yi)催化粘(zhan)性(xing)末(mo)(mo)(mo)端之(zhi)間或(huo)平滑末(mo)(mo)(mo)端之(zhi)間的(de)(de)(de)(de) DNA 的(de)(de)(de)(de)連(lian)(lian)接，也 可(ke)(ke)以(yi)催化 DNA 與 RNA 之(zhi)間以(yi)及少(shao)數 RNA 之(zhi)間的(de)(de)(de)(de)連(lian)(lian)接。可(ke)(ke) 應(ying)用(yong)于在粘(zhan)性(xing)末(mo)(mo)(mo)端或(huo)平末(mo)(mo)(mo)端連(lian)(lian)接雙鏈(lian) DNA 分子(zi)，也可(ke)(ke)應(ying)用(yong) 于修補雙鏈(lian) DNA、RNA 或(huo) DNA RNA 雜交體(ti)上的(de)(de)(de)(de)缺口。

組分

儲存：-20°C 可保存 2 年。
活性定義：16°C 反應 30 分鐘條件下，使 1pmol 的粘性末端
DNA 連接所需要的酶量定義為 1Unit。
失活：65°C，10 分鐘。
10×T4 Ligase Buffer：500 mM Tris-HCl, pH 7.5, 50 mMMgCl2, 25mM DTT, 5mM ATP.
操作方法
1. 按以下組分配制反應體系
10×T4 Ligase Buffer 2 μl
載體 50 ng(0.2-1pmol)
插入片段 1-50 ng(0.2-10pmol)
T4 DNA Ligase(200 U/μl) 1 μl
ddH2O Up to 20 μl
注意：兩個片段的連接時，通常載體與插入片段的摩爾比為1:3（但該比例并非絕對嚴謹，在 1:1-1：10 范圍內均可獲得理想的實驗結果），提取根據片段大小與濃度，計算其摩爾濃度。
2. 如為粘(zhan)末端連接(jie)反應， 22°C （16-37°C）連接(jie) 30min，連接(jie)產物直接(jie)用(yong)于(yu)轉(zhuan)化（或(huo)凍(dong)存于(yu)-20°C）。