大腸桿菌蛋白提取液

商品屬性(xing)：

產品(pin)名稱	規格(ge)	貨(huo)號(hao)
大腸桿菌蛋白提取液	100ml	BJ-PJ6654

商品(pin)介(jie)紹：

描述：生產的(de)大(da)(da)腸(chang)桿(gan)菌(jun)蛋(dan)(dan)(dan)白提取(qu)(qu)液(ye)采用(yong)獨特的(de)中(zhong)性(xing)裂解 配方，從而(er)最大(da)(da)限度的(de)提高了后續提取(qu)(qu)蛋(dan)(dan)(dan)白的(de)活(huo)性(xing)。使用(yong)該(gai) 溶液(ye)從大(da)(da)腸(chang)桿(gan)菌(jun)中(zhong)提取(qu)(qu)蛋(dan)(dan)(dan)白不需要超聲波破碎(sui)等復雜的(de)操 作步驟，溶液(ye)置于 4°C 可(ke)長期保(bao)存，使用(yong)方便。該(gai)溶液(ye)室溫 30min 可(ke)破碎(sui) 95％以(yi)上(shang)的(de)細胞，裂解后的(de)溶液(ye)可(ke)直(zhi)接通過 Ni-NTA 等純(chun)化(hua)填料進行(xing)蛋(dan)(dan)(dan)白純(chun)化(hua)。該(gai)溶液(ye)既可(ke)適(shi)(shi)用(yong)于小量(liang)(liang) 蛋(dan)(dan)(dan)白表達(da)檢測，也(ye)適(shi)(shi)用(yong)于大(da)(da)量(liang)(liang)蛋(dan)(dan)(dan)白的(de)表達(da)純(chun)化(hua)試驗；既適(shi)(shi)用(yong) 于純(chun)化(hua)可(ke)溶型蛋(dan)(dan)(dan)白，也(ye)適(shi)(shi)用(yong)于純(chun)化(hua)包涵(han)體蛋(dan)(dan)(dan)白。
主要特征
♦ 單組分溶液，使用方便
♦ 裂解迅速，蛋白不會變性
♦ 適(shi)用于小量或大規模(mo)蛋白(bai)表(biao)達
♦ 適用于(yu)可溶性蛋白和(he)包涵(han)體純化(hua)
應用：大腸桿菌的(de)裂解和包涵(han)體(ti)純(chun)化。
儲存：置于 4°C 可保存 2 年。
操作方法
♦ 可溶型蛋白操作(zuo)方法（1 ml 菌(jun)液(ye)為例）
1. 8,000rpm 室溫離心 3min 后，棄(qi)上層(ceng)培養基，留(liu)取管底部菌(jun)體（盡量棄(qi)除(chu)掉(diao)培養基）。
2. 加入 200 μl（重懸體積不得少(shao)于 50 μl）大腸桿菌蛋白提取液(ye)重懸菌體，用吸頭吹(chui)打至無(wu)可見細胞團塊。
注：為降低(di)溶液粘(zhan)度，可加入 Benzonase 核酸(suan)內(nei)切酶至 0.25U/μL；加入終濃度為 1 mg/ml 的(de)溶菌酶效果更(geng)佳。
3. 置于室(shi)溫孵育 30-60min，期間輕彈(dan)離心管數次以(yi)加速裂解。
4. 裂解完成后 13,000rpm 于 4℃離心(xin) 15-20min，將上清轉移至新的容器中，溶(rong)液(ye)可直接進(jin)行下一步純化或檢測試驗。
♦ 包涵體蛋(dan)白操(cao)作方法
5. 上述步(bu)驟 4 中，棄上清，保留(liu)沉淀組分(fen)，用 200 μl 的大腸桿菌蛋(dan)白提取液重懸沉淀。
6. 加入溶菌酶至(zhi)終濃度 1 KU/ml，混合均勻，室溫孵(fu)育 10min。
7. 加入 800 μl 的滅菌水混合均(jun)勻。
8. 13,000 rpm 室(shi)溫離心 15-20min，棄上清后用 900 μl 滅菌水重懸沉淀，然(ran)后加(jia)入 200 μl 大腸桿菌蛋白提取液(ye)，混合均勻。
9. 13,000rpm 室溫離心 15-20min，重復步驟 8 三至五次(ci)。
10. 將沉淀(dian)溶(rong)(rong)解(jie)于變性溶(rong)(rong)液(ye)中，進行下一步純化或復性試驗。