組織 / 細胞基因組 DNA 快速提取試劑盒

商品(pin)屬性：

產品(pin)名稱	規格	貨號
組織 / 細胞基因組 DNA 快速提取試劑盒	100 次	BJ-PJ6351
組織 / 細胞基因組 DNA 快速提取試劑盒	100 次×2	BJ-PJ6351

商品介紹：

保存條件：本試劑盒在室溫儲存 12 個月不影(ying)響使(shi)用效(xiao)果。
產品介紹：
獨特的(de)結合液/蛋白酶 K 迅速裂解細(xi)胞(bao)和(he)(he)滅(mie)活細(xi)胞(bao)內核酸(suan)酶，然(ran)后基(ji)因(yin)組 DNA 在(zai) 高(gao)離序鹽狀(zhuang)態下(xia)選擇性吸(xi)附于離心柱(zhu)內硅基(ji)質(zhi)膜(mo)，再通(tong)過一系列快速的(de)漂洗－離心的(de) 步驟，抑制物(wu)(wu)去除液和(he)(he)漂洗液將細(xi)胞(bao)代謝物(wu)(wu)、蛋白等雜質(zhi)去除，最后低鹽的(de)洗脫(tuo)緩沖 液將純凈基(ji)因(yin)組 DNA 從硅基(ji)質(zhi)膜(mo)上(shang)洗脫(tuo)。
產品特點：
1.重復(fu)性好:離心吸(xi)附(fu)(fu)柱內硅基質膜(mo)全部采用進(jin)口特制(zhi)吸(xi)附(fu)(fu)膜(mo)，柱與柱之間(jian)吸(xi)附(fu)(fu)量差異極小(xiao)。克服了(le)國產試(shi)劑盒膜(mo)質量不穩定的弊端。
2.多次柱漂洗確保高純度(du)，OD260/OD280 典型的比值(zhi)達(da) 1.7～1.9，長度(du)可達(da) 30kb -50kb，可直接用于 PCR，Southern-blot 和各(ge)種酶切(qie)反(fan)應。
注意事項：
1.結(jie)合液 CB 或者抑制物(wu)去除(chu)液 IR 低溫時可能出現析出和沉淀，可以在 37℃水浴幾(ji)分 鐘幫助重新溶解，恢復澄清透明后冷卻到室溫即可使用。

 2.避免試劑長時間暴露于空氣中產生揮發、氧化、pH 值變化。
 3.結合液 CB 和抑制物去除液 IR 中(zhong)含(han)有刺激性化(hua)合物，操作時要戴乳膠手套(tao)，避(bi)免(mian)沾染皮(pi)膚，眼睛和衣服。若(ruo)沾染皮(pi)膚、眼睛時，要用大量清水或(huo)者生理鹽(yan)水沖洗(xi)。

4.洗脫液 EB 不含有螯合劑 EDTA，不影響下游酶切、連接等反應。也可以使用水洗脫， 但應該確保批 pH 大于 7.5，pH 過低影響洗脫效率。用水洗脫 DNA 應該保存在-20℃。 DNA 如果需要長期保存，可以用 TE 緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是 EDTA 可能影響下游酶切反應，使用時可以適當稀釋。
自備試劑：無水乙醇、1xPBS 緩沖液、RNase A（10mg/ml）（RNase A(10 mg/ml) 有售）。
操作步驟：
提示：第一次使用前請先在漂洗液 WB 中加入指定量無水乙醇，充分混勻，加入后請及時在方框打鉤標記已加入乙醇，以免多次加入!
如果需要去除 RNA，可(ke)在加蛋(dan)白酶 K 溶液(ye)(ye)前先(xian)加入(ru) 4μl RNaseA（10mg/ml）溶液(ye)(ye)振蕩(dang) 15sec，室(shi)溫放置 5 min

1.組織培養細胞
a. 收集約 105-10
6懸浮細胞到一個 1.5ml 離心管；對于貼壁細胞，應該先用胰蛋白酶消化后吹打下來收集。
b. 12,000rpm 離心 10 sec，使細胞沉淀下來。棄上清，留下細胞團和大約 10-20μl殘留的液體。
c. 加 200μl 1×PBS 重懸洗滌細胞，12,000rpm 離心 10 sec，使細胞沉淀下來。棄上清, 將細胞沉淀重懸于 180μl 1XPBS 中。
d. 加入 20μl 蛋白酶 K (20mg/ml)溶液，充分混勻（可選步驟：為清除 RNA，加入 5µl RNase A（10mg/ml），振蕩混勻，可選擇室溫放置 5min），再加入 200μl結合液 CB，立刻渦旋振蕩充分混勻，在 70℃放置 10 min。
e. 冷卻后入 200μl 無水乙醇，立刻渦旋振蕩充分混勻，此時可能會出現絮狀沉淀。
f. 將上一步混合物（包括可能有的沉淀）加入吸附柱 AC 中，（吸附柱放入收集管中）12,000rpm 離心 1 min，倒掉收集管中的廢液。
g. 按操作步驟 4 繼續后續的實驗。
2.動植物組織（例如鼠肝腦或者植物葉片）
a. 新鮮或者解凍的組織在液氮中研磨成細粉后或者用解剖刀切成小碎塊（切成微塊可以提高產量）后取 20-50mg，轉入裝有 180μl 組織裂解液 TL 的 1.5ml 離心管中， 用大口徑槍頭吹打混勻。
b. 加入 20μl 的蛋白酶 K 溶液(20mg/ml)，立刻渦旋振蕩充分混勻。
c. 將裂解物放置在 55℃水浴 1-3 小時或者直到組織消化完全，期間輕柔的振蕩幾次幫助裂解。為清除 RNA，加入 5µl RNase A（10mg/ml），振蕩混勻（可選擇室溫放置 5 min）。
d. 加入 200μl 結合液 CB，立刻渦旋振蕩充分混勻，70℃放置 10 min。
e. 冷卻后加入 200μl 無水乙醇，立刻渦旋振蕩充分混勻，此時可能會出現絮狀沉淀。
f. 用 1ml 的槍頭吸取混合物，將混合物加入一個吸附柱 AC 中，（吸附柱放入收集管中）12,000rpm 離心 1 min，倒掉收集管中的廢液。
g. 按操作步驟 4 繼續后續的實驗。
3.動物組織（鼠尾）
a.將 0.2-0.5cm 的鼠尾巴尖(即 20-50mg)剪碎（一定要剪 0-2cm 范圍內的尾巴尖，否則裂解效果不好），或者在液氮中研磨組織成細粉后，轉入裝有 180μl 組織裂解液 TL 的 1.5ml 離心管中， 用大口徑槍頭吹打混勻。
b.加入 20μl 的蛋白酶 K(20mg/ml)，立刻渦旋振蕩充分混勻。
c.將裂解物放置在 55℃水浴 3 小時或者直到組織消化完全，期間輕柔的振蕩幾次幫助裂解。為清除 RNA，加入 5µl RNase A（10mg/ml），振蕩混勻（可選擇室溫放置 5 min）。
d.用一個 1ml 不帶針頭的一次性輸液器抽打裂解物 2-3 次。
e.加入 200μl 結合液 CB 和 200μl 無水乙醇，立刻渦旋振蕩充分混勻。
f.12,000rpm 離心 5 min，將上清加入一個吸附柱 AC 中，（吸附柱放入收集管中）12,000rpm 離心 30-60 sec，倒掉收集管中的廢液。
g.按操作步驟 4 繼續后續的實驗。
4.加入 500μl 抑制物去除液 IR，12,000rpm 離心 30 sec，棄廢液。
5.加入 500μl 漂洗液 WB（請先檢查是否已加入無水乙醇!），12,000rpm 離心 30 sec，棄掉廢液。
6.重復操作步驟 5。
7.將吸附柱 AC 放回空收集管中，12,000rpm 離心 2 min，將吸附柱置于室溫放置數分鐘，以徹底晾干吸附材料中殘余的漂洗液, 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應。
8. 取出吸附(fu)柱 AC，放(fang)入一個干凈(jing)的(de)離(li)心管中(zhong)，在(zai)吸附(fu)膜(mo)的(de)中(zhong)間部位(wei)加(jia) 50-100 洗脫(tuo)緩沖(chong)液(ye) EB（洗脫(tuo)緩沖(chong)液(ye)事先在(zai) 65℃水浴中(zhong)預熱效(xiao)果更好），室溫放(fang)置 3-5 min，12,000rpm 離(li)心 1 min。為了增(zeng)加(jia)基因組 DNA的(de)得(de)率，將得(de)到的(de)溶液(ye)重新加(jia)入離(li)心吸附(fu)柱中(zhong)，室溫放(fang)置 2 min，12,000rpm 離(li)心 1 min。(注(zhu)意: DNA 產(chan)物應(ying)保存(cun)在(zai)-20℃，以防 DNA降解。)