Equi-phi29 DNA Polymerase

商品屬性：

產(chan)品(pin)名稱	規(gui)格	貨號
Equi-phi29 DNA Polymerase	1000U	BJ-PJ6610
Equi-phi29 DNA Polymerase	10KU	BJ-PJ6610

商品介紹(shao)：

描述：

Equi-phi29 DNA Polymerase 是(shi) phi29 的(de)(de)改造體，并經多次純化(hua)分離而得。在(zai)保留了 phi29 DNA 聚合酶(mei)的(de)(de)鏈置換、連(lian)續合成(cheng)特性（>70kb）的(de)(de)基(ji)礎上，提高了滾(gun)環擴增(zeng)的(de)(de)反應(ying)溫度(du)，該酶(mei)酶(mei)可以在(zai) 42 度(du)條件下(xia)持續的(de)(de)進行 DNA 合成(cheng)（而 phi29 DNA 聚合酶(mei)在(zai)此溫度(du)下(xia)反應(ying)活性很低(di)）。

這種(zhong)高溫的(de)反應(ying)特性，在以下(xia)幾個方面(mian)對(dui)實驗(yan)有明顯(xian)的(de)提升：

（1）在 NGS 測序中(zhong)，其提升了高 GC 含量、回文結構(gou)等復雜模板的延伸(shen)能(neng)力，使得(de) NGS 的覆蓋度更(geng)均一，降低測序所需深(shen)度；

（2）高(gao)溫的反(fan)應條件，提升了基因(yin)組 DNA的 WGA 產物的合成量(liang)，并可以(yi)進行(xing)變溫擴增；

（3）降(jiang)低測(ce)序中 Gap 區域(yu)，提升單細胞測(ce)序的數據質量和(he)完整度；

（4）降低(di)非特異性擴(kuo)增(zeng)產物；

（5）提升 MDA/RCA 等實驗的擴增性能和特異性。
除此外，該酶仍然具有很強的 3’→5’外切酶校讀功能，合成的 DNA 片段保真性高。該酶的外切酶活性較強，因此合成過程中引物需要 3’端硫代修飾，以降低外切活性對引物的切割效應。

儲存：-20℃可保存 3 年。

注意：在不同的實驗類型中，Oligo根據實驗需要自行選擇。
2. 引物和模板退火：體系配制完畢后，放置到 PCR 儀中，95℃ 3min，25℃ 3min。3. 退火完畢后，向退火產物中加入 1μl Equi-phi29 DNAPolymerase，混合均勻。
4. 擴增反應
4.1 恒溫擴增
對于環狀DNA模板采用恒溫反應作為推薦使用30℃恒溫擴增，30℃孵育 6~16h.該酶在 30-42℃條件下均可工作，
必要時根據實驗類型進行調整。
4.2 變溫擴增
對于基因組 DNA 或 cDNA 模板，推薦使用變溫擴增反應，以在短時間內獲得更高產量，并提高了低濃度模板的擴增產量。在 PCR 儀上做如下設置：
【30℃ 5min；42℃ 15s】循環 72 次（約 6h）或 120次（約 10h）.必要時，反應結束后，可于 65°C 10min 進行失活反應。
使用注意事項
（1）必要時可單獨額外添加終濃度 1 mM DTT 和 0.2mg/ml BSA，可提高反應效率。
（2）該酶的最佳反應溫度為 42 ℃ （在 30~42℃之間均有活性）。
（3）65℃ 10min 即可使該酶失活。
（4）根據實驗類型需要，調整dNTP的濃度100~500 μM。
（5）添加 Yeast Pyrophosphatase可提高 DNA 產量。
（6）反應引(yin)物 3’端的硫代修飾可避免引(yin)物降解。