細胞鋪板操作技巧指南

      做 cell biology 實驗，細胞鋪板大(da)概是(shi)(shi)(shi)很(hen)常見的一個實驗了。但是(shi)(shi)(shi)有很(hen)多人不是(shi)(shi)(shi)很(hen)得要(yao)(yao)領，鋪得不是(shi)(shi)(shi)均勻： 要(yao)(yao)么中間密周圍稀(xi)，要(yao)(yao)么周圍密中間禿(tu)頂。在這里分(fen)享(xiang)一些技(ji)巧：

1、一般96孔(kong)板每(mei)孔(kong)是加(jia)100微升細(xi)(xi)胞懸液，從孔(kong)的(de)左邊(bian)靠近底部加(jia)入(ru)(ru)，加(jia)完半(ban)邊(bian)板后(hou)，將未加(jia)的(de)細(xi)(xi)胞懸液混一下再，繼(ji)續加(jia)剩(sheng)余(yu)的(de)半(ban)邊(bian)板子，都加(jia)完后(hou)蓋(gai)(gai)上蓋(gai)(gai)子，左手輕(qing)輕(qing)扶住板的(de)左邊(bian)，右(you)手輕(qing)輕(qing)敲(qiao)(qiao)擊板的(de)右(you)邊(bian)緣，注意(yi)把握(wo)力度(du)（一般輕(qing)巧敲(qiao)(qiao)三下），太強或次(ci)數(shu)太多會導致細(xi)(xi)胞集中成堆，將板順時(shi)(shi)針旋轉（逆時(shi)(shi)針效果不(bu)好），依次(ci)敲(qiao)(qiao)擊剩(sheng)余(yu)三個邊(bian)，靜置約5分(fen)鐘，放(fang)入(ru)(ru)37度(du)培養箱。

2、細胞懸液加完后，將細胞培養(yang)板抬高，對著(zhu)燈光，從底(di)部(bu)往上看，看細胞有沒(mei)有抱(bao)團。然后從底(di)部(bu)敲擊，使之分散。

3、如果實驗室(shi)有平(ping)板振蕩器的話，建議用這(zhe)個儀器稍振蕩一下，效(xiao)果不錯(cuo)，就是振幅(fu)小(xiao)，頻率高的那種。

4、細胞(bao)要盡量打散，大(da)部分呈單個(ge)(ge)狀態。離心(xin)后，要充(chong)分懸浮(fu)！還(huan)有轉移到(dao)(dao)六孔板后，是要晃得！晃的時(shi)候不(bu)要讓那個(ge)(ge)細胞(bao)液轉圈，不(bu)然細胞(bao)就(jiu)全被(bei)帶到(dao)(dao)中間去了，就(jiu)會不(bu)均(jun)勻！

5、一瓶細胞長滿后(hou)，正常處理，在培養瓶里吹勻(yun)，然后(hou)鋪6孔板，每孔2毫升，鋪完之(zhi)后(hou)不用觀(guan)察直接(jie)用酒精(jing)棉擦(ca)拭，然后(hou)放到培養箱(xiang)里，輕微的左三圈 右三圈 前三圈 后(hou)三圈。基本上24小時之(zhi)后(hou)觀(guan)察 每孔的細胞都會很均勻(yun)。

6、計(ji)算好所需要的(de)全(quan)部液體(ti)量和(he)細(xi)胞量，混勻后，加到六孔板(ban)(ban)里，六孔板(ban)(ban)按橫8字型晃，顯微(wei)鏡下觀(guan)察，如果不均勻，按上(shang)述方法(fa)再(zai)晃。如果細(xi)胞未計(ji)數直接種(zhong)的(de)話，在種(zhong)六孔板(ban)(ban)的(de)過程中，隨時晃一(yi)下混勻用的(de)瓶子，瓶子我通常是(shi)順時針(zhen)或逆時針(zhen)轉圈。

7、放在水平板面上先(xian)上下移(yi)動(dong)，再左右移(yi)動(dong)，每(mei)個方向５到(dao)６次，但關鍵的是搖完后直接放入培養(yang)箱中(zhong)，不要(yao)再做過多的運動(dong)，例(li)如放到(dao)鏡下去看，否則(ze)很容易就又聚(ju)到(dao)中(zhong)間去了。