常見的RNA酶抑制劑介紹

    RNA酶抑制劑具有(you)廣(guang)譜(pu)的(de)RNA酶(mei)抑(yi)制(zhi)作用(yong)，包括(kuo)中(zhong)性的(de)真核生物的(de)RNA的(de)抑(yi)制(zhi)作用(yong)。分子量(liang)是50kDa的(de)蛋白質通過非(fei)共價鍵與(yu)RNA酶(mei)以1：1的(de)比例(li)結(jie)合發揮它(ta)的(de)抑(yi)制(zhi)作用(yong)。RNA酶(mei)抑(yi)制(zhi)劑(ji)與(yu)RNA酶(mei)結(jie)合的(de)有(you)效濃度時(shi)10-14M。而(er)且，RNA酶(mei)抑(yi)制(zhi)劑(ji)的(de)動力學結(jie)合是非(fei)常迅速(su)的(de)，確(que)保與(yu)RNA酶(mei)的(de)迅速(su)絡合，并(bing)對其產生迅速(su)的(de)抑(yi)制(zhi)作用(yong)。下(xia)面(mian)介紹３種廣(guang)泛應用(yong)的(de)特(te)異性RNA酶(mei)抑(yi)制(zhi)劑(ji)。

1、RNA酶(mei)(mei)(mei)的(de)(de)(de)(de)蛋(dan)白質(zhi)抑(yi)(yi)(yi)制(zhi)(zhi)(zhi)劑(ji)(ji)(ji)是(shi)(shi)(shi) 從(cong)人胎盤分離(li)的(de)(de)(de)(de)一(yi)種蛋(dan)白質(zhi)可與多種RNA酶(mei)(mei)(mei)緊(jin)密結(jie)(jie)合（KI≈3x1010）形(xing)成非(fei)共價結(jie)(jie)合的(de)(de)(de)(de)等摩爾復合物，使RNA酶(mei)(mei)(mei)失(shi)活。此蛋(dan)白質(zhi)體(ti)內(nei)可能(neng)是(shi)(shi)(shi)血(xue)管(guan)生成素(su)(su)的(de)(de)(de)(de)抑(yi)(yi)(yi)制(zhi)(zhi)(zhi)劑(ji)(ji)(ji)，血(xue)管(guan)生成素(su)(su)是(shi)(shi)(shi)氨(an)基酸序列和推測的(de)(de)(de)(de)三(san)級結(jie)(jie)構(gou)與胰RNA酶(mei)(mei)(mei)類似的(de)(de)(de)(de)一(yi)種血(xue)管(guan)生成因子(zi)， 幾(ji)個廠家以不(bu)同的(de)(de)(de)(de)商品名(ming)出售這種抑(yi)(yi)(yi)制(zhi)(zhi)(zhi)劑(ji)(ji)(ji)，該蛋(dan)白質(zhi)應(ying)置于含5mmol/L二硫蘇糖醇（DTT）的(de)(de)(de)(de)50％甘油中(zhong)(zhong)，貯存于－20℃。抑(yi)(yi)(yi)制(zhi)(zhi)(zhi)劑(ji)(ji)(ji)制(zhi)(zhi)(zhi)品凍(dong)融(rong)數(shu)次后或(huo)放置在(zai)氧化(hua)(hua)條件下即(ji)應(ying)棄之(zhi)不(bu)用(yong)，因為上述處理會使蛋(dan)白質(zhi)變性(xing)從(cong)而(er)釋放出所(suo)結(jie)(jie)合的(de)(de)(de)(de)RNA酶(mei)(mei)(mei)。因此，在(zai)使用(yong)變性(xing)劑(ji)(ji)(ji)裂解哺乳動物細胞這一(yi)提取RNA的(de)(de)(de)(de)初始(shi)步聚中(zhong)(zhong)不(bu)應(ying)使用(yong)這種蛋(dan)白抑(yi)(yi)(yi)制(zhi)(zhi)(zhi)劑(ji)(ji)(ji)。然而(er)職(zhi)用(yong)更溫和的(de)(de)(de)(de)裂解方(fang)法時應(ying)使用(yong)這種抑(yi)(yi)(yi)制(zhi)(zhi)(zhi)劑(ji)(ji)(ji)，并且(qie)(qie)在(zai)后續的(de)(de)(de)(de)所(suo)有RNA純化(hua)(hua)步驟中(zhong)(zhong)均應(ying)有此蛋(dan)白質(zhi)存在(zai)。由(you)于酚抽提可以除(chu)蛋(dan)白質(zhi)抑(yi)(yi)(yi)制(zhi)(zhi)(zhi)劑(ji)(ji)(ji)，故應(ying)在(zai)純化(hua)(hua)過程中(zhong)(zhong)補加幾(ji)次抑(yi)(yi)(yi)制(zhi)(zhi)(zhi)劑(ji)(ji)(ji)。其(qi)最大活性(xing)的(de)(de)(de)(de)發揮(hui)要求巰基試劑(ji)(ji)(ji)，而(er)且(qie)(qie)它并不(bu)干擾反轉錄或(huo)mRNA在(zai)無細胞體(ti)系中(zhong)(zhong)的(de)(de)(de)(de)翻(fan)譯。

2、氧釩核糖核苷復合物  這種由氧釩（1V）離子和4種核糖核苷之中的任意一種所形成的復合物，是量種過渡態類似物，它能與多種RNA酶結合并幾科能百分之百地抑制RNA酶的活性。這４種氧釩核糖核苷復合物可加入完整細胞中，在RNA提取和純化的所有過程中，其使用濃度都是10mmol/L。所得到的mRNA可直接在硅卵母細胞中進行翻譯， 并能作為某些外酶促反應（如mRNA反轉錄）的模板。然而氧釩核糖核苷復合物強烈抑制mRNA在無細胞體系中的翻譯，因此必須用含0.1 ％羥基喹淋的苯酚[ 用0. 01mol/LTris.Cl(pH7.8)平衡]多次抽提以去除之。有幾家公司出售氧釩核糖核苷復合物。
3、Macaloid（硅藻上）Macaloid是一咱粘(zhan)土，很多年(nian)前就發現它(ta)能吸(xi)附RNA酶(mei)，用緩沖液將其制成(cheng)漿(jiang)液，以0.015％（W/V）的終濃(nong)度溶解細胞。 這種粘(zhan)土隨同它(ta)所吸(xi)附的RNA酶(mei)可(ke)在后續(xu)的RNA純化(hua)過程中（如酚抽(chou)提后）經離心(xin)去除。