培養基滅菌方法小結
培養基(Medium)是供微生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)(wu)(wu)、植物(wu)(wu)(wu)和(he)動物(wu)(wu)(wu)組(zu)織生(sheng)(sheng)(sheng)長和(he)維持用的人工配制的養料,一(yi)般都含有(you)碳(tan)水化(hua)合物(wu)(wu)(wu)、含氮物(wu)(wu)(wu)質、無機鹽(包括微量(liang)元素)以及生(sheng)(sheng)(sheng)長素和(he)水等。在發酵過程中,培養基滅(mie)菌(jun)(jun)主要有(you)以下幾個原(yuan)因:如(ru)不滅(mie)菌(jun)(jun),會使生(sheng)(sheng)(sheng)物(wu)(wu)(wu)反應(ying)的基質或產(chan)(chan)(chan)物(wu)(wu)(wu),因雜(za)菌(jun)(jun)的消耗而損失(shi),造成(cheng)生(sheng)(sheng)(sheng)產(chan)(chan)(chan)能力的下降;雜(za)菌(jun)(jun)也(ye)會產(chan)(chan)(chan)生(sheng)(sheng)(sheng)代謝產(chan)(chan)(chan)物(wu)(wu)(wu),這就使產(chan)(chan)(chan)物(wu)(wu)(wu)的提取更加困(kun)難,造成(cheng)得率降低,產(chan)(chan)(chan)品質量(liang)下降;雜(za)菌(jun)(jun)大量(liang)繁(fan)殖后(hou),會改變反應(ying)液的pH值,使反應(ying)異常(chang);有(you)些雜(za)菌(jun)(jun)會分解產(chan)(chan)(chan)物(wu)(wu)(wu),使生(sheng)(sheng)(sheng)產(chan)(chan)(chan)失(shi)敗(bai);如(ru)果發生(sheng)(sheng)(sheng)噬菌(jun)(jun)體污染,生(sheng)(sheng)(sheng)產(chan)(chan)(chan)菌(jun)(jun)細胞將被(bei)裂解,使生(sheng)(sheng)(sheng)產(chan)(chan)(chan)失(shi)敗(bai)。
常見的滅菌方法:
1、輻射滅菌
輻(fu)射(she)滅(mie)菌(jun)(jun)(jun)的(de)(de)原理是利(li)用高能量的(de)(de)電磁輻(fu)射(she)與菌(jun)(jun)(jun)體(ti)核酸的(de)(de)光化學反(fan)應造(zao)成菌(jun)(jun)(jun)體(ti)死(si)亡。常用的(de)(de)有紫外(wai)線(xian)、X射(she)線(xian)和(he)γ射(she)線(xian)。用于室內空(kong)氣及器(qi)皿表面滅(mie)菌(jun)(jun)(jun)。
2、化學物質滅菌
原理:藥物與微生物細(xi)胞(bao)中的(de)成分反(fan)應,使(shi)蛋白質變性酶失活(huo)。使(shi)用范圍:器皿、雙手(shou)和(he)實驗室、無菌(jun)室的(de)環境(jing)滅(mie)菌(jun),不能用于(yu)培(pei)養基滅(mie)菌(jun)。
常用的(de)滅菌(jun)劑:甲醛 37% 戊2醛 2% 高錳酸(suan)k 0.1%-0.25% ben酚(fen) 0.1%-0.15%
漂bai粉 5% 過氧yi 酸(suan) 0.02%-0.2% 酒精 75% 焦碳酸(suan)2乙酯 0.01%-0.1% 煤(mei)酚皂(來蘇爾) 1%—5%
3、干熱滅菌
滅菌原理是利用高溫(wen)對(dui)微生物有(you)氧化、蛋(dan)白質變性和電(dian)解(jie)質濃縮作用而(er)殺滅微生物。常用灼燒和電(dian)熱箱加熱,140-180℃ 1-2小時。適于對(dui)玻(bo)璃及金屬用具及沙土管滅菌。
4、濕熱滅菌
滅(mie)(mie)菌原理是(shi)直接(jie)用蒸(zheng)汽(qi)(qi)滅(mie)(mie)菌,蒸(zheng)汽(qi)(qi)在(zai)冷凝時能(neng)釋放出大(da)量潛熱(re),蒸(zheng)汽(qi)(qi)具有強大(da)的穿(chuan)透力,破壞菌體蛋白和核酸(suan)的化學鍵(jian),使(shi)酶失(shi)活,微生物因代(dai)謝障(zhang)礙而(er)死亡。水煮常壓滅(mie)(mie)菌:100℃。或飽和蒸(zheng)汽(qi)(qi)滅(mie)(mie)菌:一般121℃,30分鐘。適合培養基和發酵設備滅(mie)(mie)菌。
5、過濾除菌
除(chu)(chu)菌原理(li)是利用微生(sheng)物不能透過濾膜除(chu)(chu)菌。方法是使(shi)用0.01~0.45 mm孔徑濾膜,用于壓(ya)縮空(kong)氣、酶溶(rong)液(ye)及其他不耐熱化合物溶(rong)液(ye)除(chu)(chu)菌。
在工(gong)業(ye)生產中,對(dui)于培養基、管道(dao)、設備的滅菌,通(tong)常采用蒸汽(qi)加熱到一定的溫(wen)度,并保溫(wen)一段時間(jian)的滅菌方法,稱(cheng)之為(wei)濕熱滅菌。濕熱滅菌的顯著優點是:使用方便,無污染,而且其冷凝水(shui)可(ke)(ke)以直接冷凝在培養基中,也(ye)可(ke)(ke)以通(tong)過管道(dao)排(pai)出(chu)。
培養(yang)(yang)基滅(mie)(mie)(mie)菌(jun)大多(duo)數用(yong)濕熱(re)滅(mie)(mie)(mie)菌(jun)。衡量熱(re)滅(mie)(mie)(mie)菌(jun)的(de)(de)指標(biao)很多(duo),最常(chang)用(yong)的(de)(de)是“熱(re)死時間(jian)(jian)”,即在(zai)限定(ding)的(de)(de)溫(wen)度(du)(du)下殺(sha)死原(yuan)有微生物(wu)中一定(ding)比例所需(xu)的(de)(de)持續(xu)時間(jian)(jian)。影響熱(re)滅(mie)(mie)(mie)菌(jun)的(de)(de)溫(wen)度(du)(du)和(he)時間(jian)(jian)的(de)(de)因素很多(duo),包(bao)括:微生物(wu)種類、性質、濃度(du)(du)和(he)培養(yang)(yang)基的(de)(de)性質、濃度(du)(du)等。