人ELISA試劑盒競賽法的扼要操作過程

當小分子抗原或半抗原因缺少可作夾心法的兩個以上的抗體位點，因而不能用雙抗體夾心法進行測定，能夠選用競賽法形式。經洗刷后分成兩組：一組加酶符號抗原和被測抗原的混合

液，而另一組只加酶符號抗原，再經孵育洗刷后加底物顯色，這兩組底物降解量之差，即為所要測定的不知道抗原的量。小分子激素、藥物等ELISA測定多用此法。

人ELISA試劑盒競賽法的扼要操作過程：

1.  以稀釋液將待檢標本做適當稀釋（預試中確定）加入包被有已知抗原的酶標板中（50ul/孔），加封口膠帶于37℃作用30min。
2.  棄反應液，以沖洗液連續洗板5次并于吸水紙上拍干。
3.  加入酶標抗體（濃度在預試中確定）。加封口膠帶后于37℃作用30min。
4.  重復第2步。
5.  加底物（濃度在預試中確定），加封口膠帶后于室溫下避光作用5-60 min，其間不時觀察，顯色滿意后加終止液50ul/孔。
6.  于酶標儀測定OD值，OPD用492nm測定，TMB用450nm測定。

注意事項
1.  每次實驗均應做陰性對照、陽性對照及空白對照（以PBS代替標本），后者為本底值，在分析實驗結果時應扣除本底值，陽性對照<陰性對照<空白對照實驗成立。
2.  一般認為小分子抗原宜用本法檢測，而大分子抗原則宜采用夾心法檢測，但具體宜采用哪種方法應根據試驗決定，本發與夾心法相比在操作上減少一步。包被抗體與酶標抗體如果分別采用單克隆抗體和多克隆抗體時，宜用單克隆抗體作為包被抗體，以多克隆抗體作為酶標抗體。
3.  血清標本中抗原濃度一般較低，故一般用原倍標本進行檢測，必要時可進行稀釋測定，但應重新摸索酶標抗原的濃度，以確保方法的靈敏性。
4.  以酶標記抗原的方法同酶標記抗體。
5.  其它注意事項同酶聯免疫間接法。