ELISA實驗對于樣本的處理
做(zuo)樣本的(de)(de)收集(ji)(ji)的(de)(de)時候得先有個計劃,要清楚到自己的(de)(de)檢(jian)測成(cheng)分是(shi)不是(shi)足夠穩定(ding),對于(yu)收集(ji)(ji)后就得對樣本進行(xing)檢(jian)測了,及時的(de)(de)去做(zuo)儲存,要是(shi)隔天再檢(jian)測的(de)(de)樣本可(ke)以先放到-20℃環境下保存,如果(guo)條件允(yun)許的(de)(de)話,可(ke)以放到-70℃的(de)(de)保存備(bei)用。
1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如出現沉淀,應再次離心。
2. 血漿:應根(gen)據標(biao)本(ben)的要求選(xuan)擇(ze)EDTA、檸檬酸鈉(na)或肝素作為抗凝劑,混合10-20分(fen)鐘后,離心20分(fen)鐘左(zuo)右(you)(2000-3000轉/分(fen))。仔細(xi)收(shou)集上清,保(bao)存過程(cheng)中如有沉淀(dian)形成(cheng),應該再次離心。
3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。胸腹水、腦脊液參照此實行。
4. 細胞培養上清:檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。
5. 培養細胞:檢測細胞內的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融或加入組織蛋白萃取試劑,以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。
6. 組織標本:切割標本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PB(PH7.4),或組織蛋白萃取試劑,用手工或勻漿器 將標本勻漿化。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。
7. 標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。
8. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。