細胞培養時注意事項

一、進入細胞間開(kai)始細胞培養時，必須嚴格按照下(xia)列步驟操作

1.確定所有的細(xi)胞操作(zuo)用(yong)的溶(rong)液(ye)(ye)(ye)和耗(hao)材都已經(jing)消毒并檢(jian)測沒(mei)有問題，不確定的溶(rong)液(ye)(ye)(ye)和耗(hao)材請勿使用(yong)，除非特殊情況，不要借(jie)用(yong)別人的溶(rong)液(ye)(ye)(ye)。

2.確定衣服的(de)袖口已(yi)經卷起或者白大(da)褂的(de)袖口已(yi)經扎緊。

3.確定酒精燈內的酒精量，需要(yao)的話及時進行補充。

4.確定所(suo)有需要用到的溶液(ye)和耗材都放(fang)在伸手(shou)可及的位置。為了方便單手(shou)開啟瓶(ping)蓋，實(shi)驗開始前可以(yi)把所(suo)有瓶(ping)蓋旋松(song)。

5.盡量(liang)不要直接(jie)傾(qing)倒溶液，除非瓶口(kou)沒有被(bei)燒壞。如(ru)果傾(qing)倒失敗，溶液粘在(zai)瓶口(kou)，請用噴(pen)過75%酒精(jing)的紙(zhi)巾仔(zi)細清(qing)潔瓶口(kou)周(zhou)圍（不要接(jie)觸(chu)到瓶口(kou)）后在(zai)火(huo)焰上(shang)簡單燒灼(zhuo)。

6.操作(zuo)時(shi)如(ru)果不能肯(ken)定(ding)所(suo)用的耗材是潔凈(jing)的，必須(xu)及時(shi)更換。

7.實驗完畢(bi)及時(shi)收拾(shi)，保持工作區域清(qing)(qing)潔整(zheng)齊，最后(hou)用75%酒(jiu)精(jing)清(qing)(qing)潔臺面(mian)。

二、細胞污染的預防(fang)

1.實(shi)驗用品防(fang)止污(wu)染。細胞培(pei)養所用試劑、耗材、器材的(de)清(qing)洗、消毒要(yao)徹底，各種(zhong)溶液滅菌要(yao)仔細，并在(zai)無菌實(shi)驗檢測陰性后才能使用。操作室及剩(sheng)余的(de)無菌器材要(yao)定期清(qing)潔、消毒、滅菌。

2.操(cao)作過程防止污染。

3.穿著容易起靜電或吸附灰塵的(de)衣物(wu)必須更(geng)換為(wei)白大褂(gua)后才能進入細胞間(jian)。

4.實驗開始前需要確定戴的(de)手套沒有(you)問題，只要接(jie)觸(chu)過生(sheng)物安全柜之外的(de)物品，必須(xu)及時對手套進行消(xiao)毒。

5.進入細(xi)胞培養間后關好門，坐下來盡量少走動以免(mian)影響生物安全柜的風簾。工作開始前要(yao)先(xian)用(yong)75%酒精(jing)棉球擦手(shou)和(he)瓶蓋。事先(xian)要(yao)嚴格檢查所用(yong)的器(qi)材、溶液和(he)細(xi)胞，不要(yao)把污染品或(huo)未經消毒的物品帶入無菌(jun)室內，更不能隨便(bian)使(shi)用(yong)，以免(mian)造成大規模污染。

6.細(xi)胞操作時動(dong)作要(yao)輕，必須在(zai)火(huo)焰(yan)周(zhou)圍(wei)無菌區(qu)內打開瓶(ping)(ping)口，并將(jiang)瓶(ping)(ping)口放在(zai)火(huo)焰(yan)周(zhou)圍(wei)簡(jian)單轉(zhuan)動(dong)燒灼，注意不要(yao)讓火(huo)焰(yan)把塑料瓶(ping)(ping)口燒化。

7.實驗操作時(shi)(shi)生物安全(quan)柜的隔板(ban)要(yao)盡可能放(fang)低，盡量(liang)減少談話(hua)，打(da)噴嚏或咳嗽時(shi)(shi)絕對不(bu)能對著工作區，以免(mian)造成不(bu)必要(yao)的污染(ran)。

8.瓶(ping)蓋(gai)應當倒(dao)放在遠(yuan)離自己(ji)的(de)地方，以避免瓶(ping)蓋(gai)被誤操(cao)作所污染(ran)。

9.不要從敞開的容器口上方(fang)經(jing)過，以避免衣服(fu)上掉落(luo)不明物體對細胞(bao)的污染。

10.實(shi)(shi)驗(yan)操作時(shi)要注(zhu)意及(ji)時(shi)更(geng)換巴(ba)斯德吸(xi)管、移液槍(qiang)槍(qiang)頭和(he)移液管，切勿一(yi)根管子做到底。一(yi)旦(dan)發現接觸了非潔凈或者(zhe)無法確定潔凈的物品必(bi)須直接丟棄。實(shi)(shi)驗(yan)完畢應(ying)及(ji)時(shi)收拾，保持實(shi)(shi)驗(yan)室清潔整齊，最(zui)后用75%酒(jiu)精清潔臺面(mian)。

三、防止細(xi)胞(bao)交(jiao)叉污染

1.在進行(xing)多種(zhong)細(xi)胞培(pei)養操(cao)(cao)作時，所(suo)用器具(ju)要嚴(yan)格區(qu)分，最好作上標記便于(yu)辨別。按(an)順序進行(xing)操(cao)(cao)作，一次只處理(li)一種(zhong)細(xi)胞，多種(zhong)細(xi)胞多種(zhong)操(cao)(cao)作一起(qi)進行(xing)時易發生(sheng)t昆亂。

2.在進(jin)行(xing)換液或傳代(dai)操作時，粘有細胞(bao)的移(yi)液槍頭和(he)移(yi)液管不要觸(chu)及試劑瓶(ping)(ping)瓶(ping)(ping)口，以免把細胞(bao)帶到培(pei)養基中(zhong)污染(ran)其(qi)他細胞(bao)。

3.所有細胞一旦(dan)(dan)購(gou)置，或從別處引入，或自己建立，必(bi)須(xu)及時保種凍(dong)存，一旦(dan)(dan)發生污染可重(zhong)新復蘇細胞，繼續(xu)培(pei)養(yang)。