抗體特異性的選擇需考慮的四個方面

特(te)異性的選擇主要需要考慮四個方面(mian)：蛋白特(te)異性、種屬(shu)特(te)異性、實驗方法特(te)異性、標(biao)記物的特(te)異性。

1、蛋白特(te)異性針(zhen)對(dui)需(xu)要檢(jian)測的(de)蛋白查找抗體，幾個細節要區分：

a. 重(zhong)組蛋白如果不是全長表達，則需要注意抗體的免疫(yi)原區域(yu)是否在重(zhong)組蛋白區域(yu)內。

b.內源性(xing)蛋白最好能清楚其剪切與修飾的方式，特殊表型的蛋白需要進(jin)行序(xu)列比對，并結合抗體(ti)免疫原序(xu)列，查(cha)看(kan)交(jiao)叉反應的情(qing)況。

c.磷酸(suan)化蛋(dan)白檢測需要(yao)確定具(ju)體位點，不(bu)(bu)同位點的磷酸(suan)化意味著可能有不(bu)(bu)同的機制存在，不(bu)(bu)宜一(yi)概(gai)而(er)論。

2、種屬(shu)特異性(xing)同種蛋(dan)白不同物種，有著或(huo)大或(huo)小(xiao)的差異。

a. 目前(qian)大部(bu)分商品化(hua)抗體都是以人源蛋白(bai)(bai)序列為模板重(zhong)組蛋白(bai)(bai)或設計多(duo)肽抗原的(de)(de)(de)，根(gen)據蛋白(bai)(bai)的(de)(de)(de)同源性(xing)的(de)(de)(de)情況與(yu)其他種屬發生交叉反(fan)應(ying)。需要參(can)照(zhao)說明(ming)書(shu)注(zhu)明(ming)的(de)(de)(de)可反(fan)應(ying)種屬信(xin)息。

b. 一些稀(xi)有種屬很難(nan)找到(dao)抗(kang)體，可以(yi)通過蛋白的序列比對，選擇同源序列免疫(yi)的抗(kang)體，不(bu)過一般這種情況生產商不(bu)會受理其關(guan)于質(zhi)量的申(shen)訴，如果(guo)可以(yi)申(shen)請到(dao)免費的抗(kang)體樣(yang)品，則利于抗(kang)體選擇。

3、實驗方(fang)法(fa)特異性目(mu)前使用抗(kang)體的(de)(de)實驗方(fang)法(fa)有很多，不同的(de)(de)使用方(fang)法(fa)過程中，因為(wei)對蛋(dan)白(bai)(bai)樣品的(de)(de)處理方(fang)式不一(yi)樣，蛋(dan)白(bai)(bai)的(de)(de)含量有差異，對抗(kang)體的(de)(de)識別表位和(he)效價要求都是不一(yi)樣的(de)(de)。

4、標記物(wu)的(de)(de)(de)(de)特異性一般基于實驗(yan)(yan)操作的(de)(de)(de)(de)實驗(yan)(yan)方法不(bu)會(hui)使用(yong)(yong)帶有標記的(de)(de)(de)(de)一抗，比如 WB、IHC 等，都是通過二抗類的(de)(de)(de)(de)試(shi)劑標記達到(dao)結果(guo)呈現的(de)(de)(de)(de)目的(de)(de)(de)(de)。但(dan)是基于儀(yi)器分析的(de)(de)(de)(de)一些實驗(yan)(yan)，可能(neng)就會(hui)使用(yong)(yong)到(dao)直接標記的(de)(de)(de)(de)一抗，比如流式(shi)實驗(yan)(yan)。那么需要了解到(dao)自己將要使用(yong)(yong)的(de)(de)(de)(de)儀(yi)器能(neng)檢測到(dao)的(de)(de)(de)(de)熒光(guang)范(fan)圍，針對不(bu)通的(de)(de)(de)(de)參(can)數要求(qiu)選擇對應的(de)(de)(de)(de)標記物(wu)。在免(mian)疫熒光(guang)雙標實驗(yan)(yan)中，需要選配不(bu)同的(de)(de)(de)(de)熒光(guang)標記物(wu)。