PCR反應循環參數說明

多聚酶鏈式(shi)反應(ying)即PCR（polymerase chain reaction）技(ji)(ji)術(shu)，應(ying)用(yong)這(zhe)一技(ji)(ji)術(shu)可以(yi)將微量目(mu)的(de)基因（DNA片(pian)段）擴增一百萬倍以(yi)上(shang)。PCR反應(ying)理論的(de)提出和技(ji)(ji)術(shu)的(de)完善對(dui)于(yu)分子生(sheng)物(wu)學的(de)發(fa)展(zhan)具(ju)有(you)特殊的(de)意義，它(ta)以(yi)敏感度高(gao)、特異性強、產率高(gao)、重復性好以(yi)及快(kuai)速簡便(bian)等優點(dian)迅速成為(wei)分子生(sheng)物(wu)學研(yan)究(jiu)(jiu)中應(ying)用(yong)最為(wei)廣泛的(de)方法(fa)之(zhi)一，并使(shi)得(de)很多以(yi)往(wang)無(wu)法(fa)解決(jue)的(de)分子生(sheng)物(wu)學研(yan)究(jiu)(jiu)難題(ti)得(de)以(yi)解決(jue)。PCR反應(ying)循環(huan)參數(shu)：

1.預變性
模板DNA*變性與PCR酶的*激活對PCR能否成功至關重要，建議加熱時間參考試劑說明書，一般未修飾的Taq酶激活時間為兩分鐘。
2.變性步驟
循環中一般95℃，30秒足以使各種靶DNA序列*變性，可能的情況下可縮短該步驟時間。變性時間過長損害酶活性，過短靶序列變性不*，易造成擴增失敗。
3.引物退火
退火溫度需要從多方面去決定，一般根據引物的Tm值為參考，根據擴增的長度適當下調作為退火溫度。然后在此次實驗基礎上做出預估。退火溫度對PCR的特異性有較大影響。
4.引物延伸
引物延伸一般在72℃進行（Taq酶最適溫度）。但在擴增長度較短且退火溫度較高時，本步驟可省略延伸時間隨擴增片段長短而定，一般推薦在1000bp以上，含Pfu及其衍生物的衍生設定為1min/kbp。
5.循環數
大多數PCR含25-35循環，過多易產生非特異擴增。
6.最后延伸
 在(zai)(zai)最(zui)后一個循(xun)環后，反應在(zai)(zai)72℃維持10-30分鐘．使引物延(yan)伸*，并使單鏈產物退火成雙鏈。