ELISA實驗比色測定過程分析

      ELISA的(de)比色測定(ding)(ding)(ding)由(you)酶(mei)標(biao)儀(yi)(yi)(yi)進(jin)行(xing)，有(you)的(de)同行(xing)可(ke)能會認為(wei)(wei)，既然(ran)由(you)酶(mei)標(biao)儀(yi)(yi)(yi)進(jin)行(xing)，那么此時便(bian)可(ke)以萬事大(da)吉了，其實不然(ran)，因為(wei)(wei)當代較(jiao)為(wei)(wei)先進(jin)的(de)酶(mei)標(biao)儀(yi)(yi)(yi)器儀(yi)(yi)(yi)表，均有(you)較(jiao)多(duo)的(de)功能，使(shi)(shi)用(yong)不當，會得到令人(ren)難以理解的(de)結果。如(ru)使(shi)(shi)用(yong)酶(mei)標(biao)儀(yi)(yi)(yi)比色測定(ding)(ding)(ding)后，有(you)許多(duo)陰性測定(ding)(ding)(ding)孔的(de)吸光(guang)度(du)值(zhi)為(wei)(wei)負數或測定(ding)(ding)(ding)假(jia)陽性率大(da)大(da)增加(jia)等等。這主要是沒有(you)正(zheng)確地理解和使(shi)(shi)用(yong)酶(mei)標(biao)儀(yi)(yi)(yi)所(suo)致。

此處，只是強調下面兩(liang)點：
1、比(bi)色測定(ding)(ding)時(shi)，一(yi)定(ding)(ding)要注意酶標儀(yi)的(de)波長(chang)是否(fou)已調至合適或所用濾(lv)光片是否(fou)正確。由于有的(de)臨床實(shi)驗室在進(jin)行(xing)ELISA測定(ding)(ding)時(shi)，以TMB為底(di)物和(he)以OPD為底(di)物的(de)試劑盒(he)均有使用，而前者比(bi)色波長(chang)為450nm，后者為492nm，濾(lv)光片需(xu)根據要求隨時(shi)更換。因此，容易出現濾(lv)光片錯用的(de)問題。

2、單波長或(huo)雙波長比色(se)選擇的問題。中(zhong)檔以上(shang)的酶標(biao)儀基本上(shang)都(dou)同時具有單波長和(he)雙波長比色(se)功(gong)能。
所謂的(de)(de)(de)(de)單波(bo)(bo)長(chang)(chang)(chang)比(bi)(bi)色即(ji)是(shi)通常的(de)(de)(de)(de)以對(dui)顯(xian)色具(ju)有最大吸(xi)(xi)(xi)收(shou)的(de)(de)(de)(de)波(bo)(bo)長(chang)(chang)(chang)如(ru)(ru)450nm或(huo)492nm進行比(bi)(bi)色測定(ding)(ding)(ding)；而雙(shuang)波(bo)(bo)長(chang)(chang)(chang)雙(shuang)色則酶標儀在(zai)敏(min)感(gan)波(bo)(bo)長(chang)(chang)(chang)如(ru)(ru)450nm和(he)非敏(min)感(gan)波(bo)(bo)長(chang)(chang)(chang)如(ru)(ru)630nm下(xia)各(ge)測定(ding)(ding)(ding)一(yi)次(ci)，敏(min)感(gan)波(bo)(bo)上(shang)下(xia)的(de)(de)(de)(de)吸(xi)(xi)(xi)光(guang)(guang)度(du)測定(ding)(ding)(ding)值(zhi)(zhi)為(wei)樣本(ben)測定(ding)(ding)(ding)酶反應特(te)異顯(xian)色的(de)(de)(de)(de)吸(xi)(xi)(xi)光(guang)(guang)度(du)與(yu)板孔(kong)上(shang)指紋、刮痕、灰(hui)塵(chen)等臟物所致的(de)(de)(de)(de)吸(xi)(xi)(xi)光(guang)(guang)度(du)之和(he)；非敏(min)感(gan)波(bo)(bo)長(chang)(chang)(chang)下(xia)測定(ding)(ding)(ding)即(ji)改(gai)變波(bo)(bo)長(chang)(chang)(chang)至一(yi)定(ding)(ding)(ding)值(zhi)(zhi)，使得樣本(ben)測定(ding)(ding)(ding)酶反應特(te)異顯(xian)色的(de)(de)(de)(de)吸(xi)(xi)(xi)光(guang)(guang)度(du)值(zhi)(zhi)為(wei)零，此時測得的(de)(de)(de)(de)吸(xi)(xi)(xi)光(guang)(guang)度(du)即(ji)為(wei)臟物的(de)(de)(de)(de)吸(xi)(xi)(xi)光(guang)(guang)度(du)值(zhi)(zhi)。最后酶標儀給出的(de)(de)(de)(de)數值(zhi)(zhi)為(wei)敏(min)感(gan)波(bo)(bo)長(chang)(chang)(chang)下(xia)的(de)(de)(de)(de)吸(xi)(xi)(xi)光(guang)(guang)度(du)值(zhi)(zhi)與(yu)非常感(gan)波(bo)(bo)長(chang)(chang)(chang)下(xia)的(de)(de)(de)(de)吸(xi)(xi)(xi)光(guang)(guang)度(du)值(zhi)(zhi)的(de)(de)(de)(de)差。因此，雙(shuang)波(bo)(bo)長(chang)(chang)(chang)比(bi)(bi)色測定(ding)(ding)(ding)具(ju)有能排除由微滴板本(ben)身、板孔(kong)內標本(ben)的(de)(de)(de)(de)非特(te)異吸(xi)(xi)(xi)收(shou)、指紋、刮痕、灰(hui)塵(chen)等對(dui)特(te)異顯(xian)色測定(ding)(ding)(ding)吸(xi)(xi)(xi)光(guang)(guang)度(du)的(de)(de)(de)(de)影響(xiang)的(de)(de)(de)(de)優點，一(yi)般不必設空(kong)白(bai)(bai)孔(kong)。如(ru)(ru)在(zai)使用雙(shuang)波(bo)(bo)長(chang)(chang)(chang)比(bi)(bi)色時，仍設空(kong)白(bai)(bai)孔(kong)，就可能會造成前面提到(dao)的(de)(de)(de)(de)測定(ding)(ding)(ding)孔(kong)吸(xi)(xi)(xi)光(guang)(guang)度(du)為(wei)負數的(de)(de)(de)(de)現象(xiang)。由于ELISA測定(ding)(ding)(ding)中單個空(kong)白(bai)(bai)孔(kong)的(de)(de)(de)(de)非特(te)異吸(xi)(xi)(xi)收(shou)上(shang)有一(yi)定(ding)(ding)(ding)程度(du)的(de)(de)(de)(de)不確定(ding)(ding)(ding)性，也就是(shi)說每(mei)次(ci)測定(ding)(ding)(ding)或(huo)同次(ci)測定(ding)(ding)(ding)空(kong)白(bai)(bai)孔(kong)位置的(de)(de)(de)(de)不同均有可能得到(dao)不同吸(xi)(xi)(xi)光(guang)(guang)度(du)測定(ding)(ding)(ding)值(zhi)(zhi)，故而在(zai)ELISA測定(ding)(ding)(ding)比(bi)(bi)色時，最好是(shi)使用雙(shuang)波(bo)(bo)長(chang)(chang)(chang)比(bi)(bi)色。