抗體的制備與各抗體比較

   抗體(ti)是機體由于抗原的刺激而產生的具有保護作用的蛋白質，由漿細胞（效應B細胞）分泌。抗(kang)體可以分為多克(ke)隆(long)抗(kang)血清(qing)、單克(ke)隆(long)抗(kang)體和重組抗(kang)體，除了合成重組抗(kang)(kang)體外，幾乎所有的抗(kang)(kang)體都來自(zi)于用(yong)免(mian)疫原對實(shi)驗動物進行主動免(mian)疫。

一、抗體的(de)制備

1、多克(ke)隆抗(kang)體的制備：

①免疫方法(fa)：對多克隆(long)抗(kang)體(ti)，免疫(yi)(yi)方法(fa)(fa)一(yi)般(ban)有皮(pi)下或肌(ji)肉免疫(yi)(yi)法(fa)(fa)、皮(pi)內(nei)免疫(yi)(yi)法(fa)(fa)、淋巴結免疫(yi)(yi)法(fa)(fa)和(he)混合法(fa)(fa)等(deng)。一(yi)般(ban)來(lai)說，皮(pi)下或肌(ji)肉免疫(yi)(yi)法(fa)(fa)產生的抗(kang)體(ti)比較多；皮(pi)內(nei)免疫(yi)(yi)法(fa)(fa)所需(xu)的抗(kang)原量少，在抗(kang)原寶貴時特(te)別適用，但與(yu)之相對的，它產生的抗(kang)體(ti)量也不多。混合免疫(yi)(yi)法(fa)(fa)的優點是抗(kang)原用量小，產生抗(kang)體(ti)速(su)度(du)快。

②多(duo)克隆抗體的制備：將抗原免疫動物（常用的動物為兔、羊、狗等），分離出抗血清并純化抗體。多克隆抗體的均一性較差，其特異性相對較低，因此，多克隆抗體在農藥殘留速測技術中的應用受到一定的限制。但近年來有學者恰恰利用了多抗的交叉反應高的特點，通過制備出具有某類（或某幾種）農藥的“共性結構”的半抗原或者通過制備出含多個抗原決定簇的人工抗原來制備“寬譜特異性”抗體，進行農藥多殘留分析研究。

2、單克隆抗體的制備(bei)：

單克隆抗體制備技術最初是由K鰄ler和Milstein（1975）利用B淋巴細胞雜交瘤技術創立的。目前該技術已廣泛應用于疾病診斷及生物、醫學研究、環境和食品安全檢測（監測）等方面。單抗均一性高，只和抗原某一決定簇結合，有更高的特異性，而且，產生抗體的單克隆細胞可(ke)在體外傳代(dai)繁殖，不受動物免疫時間(jian)限制生產抗體。只(zhi)要管理和(he)培養技術正確，抗(kang)體就可無限的產生。基本(ben)過程是動物免疫、細(xi)胞融合、克隆篩選、單克隆抗(kang)體性質鑒定、腹水誘發、收集和(he)純化(hua)等。

3、重(zhong)組抗體的制(zhi)備(bei)：

近年來，隨著蛋白質技術及DNA重組技術的發展，人們通過對抗體產生的基因本質、基因重組抗體篩選技術和直接定位誘導基因操縱技術的研究，獲得用于指定空間位置并具有各種特異性、親和性，能忍受一定溫度、pH和有機溶劑的人工重組抗體。一般是將抗原免疫小鼠，一定時間后無菌條件下取出小鼠脾臟，提取脾細胞總RNA，以RNA逆轉錄合成的cDNA為模板，PCR擴增抗體，將抗體中的輕鏈、重鏈連接成ScFv（single-chainvariablefragment）。酶切經PCR擴增的ScFv片段，并與噬菌體載體連接，然后以常規方法轉化入大腸桿菌或其他生物體中。人工培養帶有噬菌體抗體的大腸桿菌，即得到重組抗體。該方法生產抗體速(su)度快，可(ke)通(tong)過誘(you)變改變抗體特(te)性，使抗體的(de)特(te)異性更強，而且，利用(yong)這項技術獲得的(de)(de)噬菌體抗體庫，能同時(shi)識別(bie)多種(zhong)農(nong)(nong)藥(yao)，可用(yong)于農(nong)(nong)藥(yao)多殘留免疫速測技術的(de)(de)研究。

二、抗體比較：

在特定應用中(zhong)，抗體(ti)的選(xuan)擇(ze)需(xu)要考慮(lv)多(duo)種因(yin)素，如特異性(xing)和(he)親和(he)力水平、制備難易程度、設備要求、所需(xu)時間和(he)費用等。從多個維度對多克隆(long)抗體、單克隆(long)抗體和(he)重組抗體進行了比較，可(ke)以(yi)根據需要以(yi)此為參照(zhao)，選擇合適的抗體類型。