原代細胞培養中遇到的問題以及解決辦法

錯誤1:

一小管原代(dai)細胞在水浴中解凍一段(duan)時(shi)間(jian)。

解決辦法：

原代細胞對(dui)解(jie)凍過程(cheng)非(fei)常敏(min)感(gan)，因此將小瓶(ping)置(zhi)于(yu)(yu)37℃水浴中，保(bao)持并(bing)輕輕旋轉(zhuan)(zhuan)直到(dao)內容物剛剛解(jie)凍是很(hen)重要的。然后(hou)應立即(ji)從(cong)水浴中取出小瓶(ping)，并(bing)轉(zhuan)(zhuan)移到(dao)無菌操作臺。確(que)保(bao)您的培養(yang)(yang)瓶(ping)在解(jie)凍前已經(jing)準備(bei)就緒，以(yi)便可(ke)以(yi)立即(ji)用于(yu)(yu)接種(zhong)細胞，并(bing)置(zhi)于(yu)(yu)培養(yang)(yang)箱中。

錯誤2:

解凍(dong)match小瓶(ping)后(hou)直接離心原代細胞(bao)。

解決辦法：

我(wo)們不建議在解凍后(hou)離心(xin)細胞，因為離心(xin)程(cheng)序比少(shao)量的(de)(de)DMSO殘留更有害(hai)。記住(zhu)，在恢復原(yuan)代細胞后(hou)的(de)(de)第二天更換培養基以去除任何殘留的(de)(de)DMSO。

錯誤3:

允許(xu)原代細胞變得過于融合。

解決辦法：

當生(sheng)長(chang)至100%匯合(he)時，原(yuan)代(dai)細胞可以變得衰(shuai)老。記住，原(yuan)代(dai)細胞不是(shi)100%純，因此重要的是(shi)盡量減少污(wu)染(ran)細胞的生(sheng)長(chang)。我們建議在(zai)細胞達到(dao)90-95%融合(he)時，對(dui)原(yuan)代(dai)細胞進行傳(chuan)代(dai)培養。

錯誤4:

傳代(dai)原代(dai)細胞(bao)時過度胰蛋白酶消化。

解決辦法：

當細胞傳代時，使用(yong)低濃(nong)度的(de)胰蛋(dan)(dan)白酶并在顯微鏡(jing)下密切監(jian)測細胞。此(ci)外，記(ji)得(de)在胰蛋(dan)(dan)白酶消(xiao)化(hua)后完全中和細胞中的(de)胰酶，因為任何活性的(de)胰蛋(dan)(dan)白酶都將損傷細胞。

錯誤5:

原代(dai)細胞可以很容(rong)易地重新凍(dong)存(cun)。

解決辦法：

通常我們不推薦重(zhong)新凍存原(yuan)代細(xi)(xi)胞，因為這可以促進細(xi)(xi)胞衰老(lao)和/或導(dao)致功能變化。原(yuan)代細(xi)(xi)胞非常敏感，重(zhong)新凍結可能導(dao)致細(xi)(xi)胞死亡或損傷。

錯誤6:

原代(dai)細胞可以無限的增殖。

解決辦法：

與細(xi)胞(bao)系不(bu)同，原代(dai)細(xi)胞(bao)具有有限的(de)(de)擴增能力。我們建議盡早(zao)使(shi)用原代(dai)細(xi)胞(bao)進(jin)行(xing)實驗(yan)以防止遺(yi)傳漂移。此外，如果(guo)你正在使(shi)用一個增值困難(nan)的(de)(de)細(xi)胞(bao)類型，你應該密切監測細(xi)胞(bao)形態，因為少量混雜的(de)(de)細(xi)胞(bao)(如成纖維細(xi)胞(bao))可能隨著時間的(de)(de)推移，大量生(sheng)長從而成為主(zhu)要細(xi)胞(bao)。